华中科技大学同济医学院医学生物学系 作品数:27 被引量:125 H指数:6 相关作者: 余从年 陈燕 王慧 滕云 李奇志 更多>> 相关机构: 河南科技大学医学院医学遗传学教研室 河南科技大学医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省自然科学基金 武汉市青年科技晨光计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
针对Toll样受体4基因的小发夹结构RNA对RAW264·7细胞炎症因子分泌的抑制作用 被引量:7 2006年 目的构建针对Toll样受体(TLR)4mRNA的小发夹结构RNA(shRNA)真核表达载体pEGFP-siRNA/TLR4,检测该shRNA诱导的RNA干扰(RNAi)对脂多糖刺激RAW264·7细胞分泌炎症因子的抑制作用,以探讨针对TLR4基因的RNAi对RAW264·7细胞炎症反应的抑制作用。方法构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及shRNA克隆位点的质粒pEGFP-H1/siRNA,运用网络工具siRNAWizard(http://www·sirnawizard·com/)设计针对TLR4mRNA的寡核苷酸片段。将其克隆入pEGFP-H1/siRNA,构建表达EGFP及TLR4-shRNA的真核表达质粒pEGFP-H1/TLR4-siRNA。运用脂质体转染技术将pEGFP-H1/TLR4-siRNA转染至培养的小鼠巨噬细胞系RAW264·7,观察细胞系中荧光蛋白的表达强度;再运用脂多糖刺激转染的RAW264·7细胞,运用ELISA方法检测该细胞系分泌炎症因子水平的变化。结果质粒pEGFP-H1/siRNA及pEGFP-H1/TLR4-siRNA分别用BbsⅠ和MluⅠ酶切电泳后,前者出现4·9kb和340bp的的条带,后者出现5·0kb和220bp的条带,与实验设计的质粒长度一致,且测序证实克隆序列正确。将pEGFP-H1/TLR4-siRNA转染至RAW264·7细胞后,EGFP的表达率为50%±8%。用脂多糖刺激后,TLR4-SiRNA转染组细胞培养液TNF-α水平(2h:825pg/ml±136pg/ml;8h:2190pg/ml±359pg/ml)明显低于对照siRNA转染组(2h:1179pg/ml±240pg/ml;8h:4720pg/ml±227pg/ml,均P<0·01)。结论针对TLR4mRNA的shRNA可能通过RNAi机制对脂多糖诱导的RAW264·7细胞炎症因子的分泌有明显的抑制作用。 张进祥 王慧 吴河水 蒋春舫 郑启昌关键词:RNA 基因沉默 脂多糖类 巨噬细胞 类风湿关节炎滑膜组织血管内皮生长因子转录和表达的研究 本研究采用半定量RT-PCR法和Northern blot检测滑膜组织血管内及生长因子(VEGF)mRNA表达水平;同时应用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法分别测定了19例类风湿关节炎(RA)患者血清、滑液中VEGF... 刘巧红 沈凌汛 吴清敏 滕云 王慧文献传递 应用细针吸取细胞学诊断睾丸及附睾肿瘤的临床探讨 2007年 目的:探讨针吸细胞学对睾丸及附睾肿瘤的诊断价值,并对其细胞学形态特征进行总结。方法:回顾性分析29例睾丸及附睾肿瘤的细胞学特征,并行病理组织学对照,对光镜分型困难者加做免疫组化。结果:细胞学诊断与组织学完全符合者27例(93.10%),细胞学可疑恶性1例(3.45%),经组织学证实为恶性,2者合计,符合率为96.55%,分型不符合1例(1/29)占3.45%,无假阳性报告。结论:针吸细胞学对睾丸及附睾肿瘤的诊断具有较高的诊断率及灵敏度,是术前诊断睾丸、附睾肿瘤的重要手段之一,若结合免疫组化,分型将更为准确,有利于临床确定治疗方案。 康劲松 雷清华 刘利敏 李钫关键词:睾丸肿瘤 针吸细胞学 医学生物学科课程体系融合改革的探索 被引量:6 2005年 屈伸 冯作化 孙军 邓耀祖 余从年 王淳本关键词:医学生物 学科融合 分子细胞生物学 医学细胞生物学 高等医学教育 教学水平 Intergeneration CAG expansion in a Wuhan juvenile-onset Huntington disease family 被引量:2 2007年 Objective To make early diagnosis of IT15 gene mutation in a Wuhan juvenile-onset Huntington disease (HD) family, for providing them with genetic counseling, and making preparation for the further research on pathogenesis and experimental therapy of HD. Methods According to the principle of informed consent, we extracted genomic DNA from peripheral blood samples and carried genetic diagnosis of pathogenic exon 1 of IT15 gene by modified touchdown PCR and DNA sequencing methods. Results Eight of twenty-five family members carried abnormal allele: Ⅲ10 Ⅲ12, IIIt4, Ⅳ3, and Ⅴ2 carded (CAG) 48, Ⅳ11 and Ⅳ12 carried (CAG) 67, and Ⅳ14 carried (CAG) 63, in contrast with the 8-25 CAG trinucleotides in the members of control group. Ⅳ14 carried 15 more CAG trinucleotides than her father Ⅲ10. Conclusion The results definitely confirm the diagnosis of HD and indicate the CAG trinucleotide repeat expansion of IT15 gene in this HD family. In addition, CAG expansion results in juvenile-onset and anticipation (characterized by earlier age of onset and increasing severity) of the patientⅣ12. 刘媛 沈滟 李和 王慧 杨真荣 陈燕 唐艳平类风湿性关节炎患者血清和滑液中血管内皮生长因子与病损程度的相关性 被引量:6 2004年 目的:研究类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者血清、滑液中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)蛋白水平,探讨其在RA致病中的作用。方法:应用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法分别测定RA患者(n=36)血清、滑液中VEGF蛋白水平。以骨关节炎(n=9)及因外伤截肢的正常人(n=13)作对照。结果:RA患者血清、滑液中VEGF水平(ng/L)分别为186±77,262±84;而对照组分别为48±17,63±27。RA患者血清、滑液中VEGF蛋白水平均显著高于对照组(t=1.63,P=0.008;t=1.72,P=0.006),且与关节疼痛数、关节肿胀数、晨僵时间、红细胞沉降率、C反应蛋白、类风湿因子滴度均呈正相关(r=0.73~0.83,P均<0.05)。结论:RA患者VEGF蛋白的过度表达是导致RA发病的重要因素。 刘巧红 沈凌汛 吴清敏 滕云 王慧关键词:类风湿性关节炎 滑液 血管内皮生长因子 病损程度 Toll样受体4突变对小鼠急性肺损伤的影响及机制 被引量:2 2006年 目的观察Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因突变型小鼠与野生型小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型中肺组织损伤差异,分析不同TLR4遗传性状对ALI发生的影响及机制。方法以TLR4基因突变小鼠(C3H/HeJ品系,TLR4-/-)及野生型小鼠(CBA品系,TLR4+/+)为研究对象,采用失血性休克复苏加内毒素攻击复制小鼠急性肺损伤动物模型,检测肺组织湿/干重比(W/D),肺组织通透指数(LPI)、MPO水平、肺组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1 beta(IL-1β)水平的差异。结果TLR4基因突变型(TLR4-/-)小鼠肺组织损伤(以W/D及LPI为衡量标准)较野生型(TLR4+/+)小鼠严重,而且与野生型小鼠比较,TLR4-/-小鼠肺组织MPO、TNF-αI、L-1β水平下降。同时TLR4-/-小鼠肺组织损伤较假手术组严重。结论TLR4胞内段突变可以减轻ALI,而且TLR4能通过介导肺内中性粒细胞聚集而介导ALI的发生。 张进祥 王慧 徐建波 蒋春舫 吴河水 郑启昌关键词:急性肺损伤 休克 低血容量性 内毒素 膜受体 TOLL样受体4 人肝细胞癌组织中SOX基因家族的异常表达 被引量:2 2004年 滕云 刘巧红 王慧 杨真荣 陈燕关键词:人肝细胞癌 家族 SOX基因 转录水平 强直性脊柱炎与肿瘤坏死因子基因启动子-308位点多态性相关的假设验证(英文) 被引量:4 2004年 背景:强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis,AS)患者中HLA-B27的阳性率在不同报道间有明显差异,这种差别可能由环境因素造成,但也可能受其它HLA或非HLA因素影响,推测另一些分子可能在AS发病中起一定作用。目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)启动子多态性与AS的相关性。设计:非随机对照实验研究。地点和对象:资料收集地点:同济医学院附属协和医院。对象:选择2000-06/2003-01武汉地区78例AS患者作为研究对象,所有AS患者均符合VanderLinder1984年修改的诊断标准,平均年龄(37.4±12.8)岁,男67例,女11例。对照组为HLA-B27阳性的武汉籍体检健康汉族人52人,平均年龄(39.2±14.4)岁,男44人,女8人。干预:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对AS患者和HLA-B27阳性健康人群进行TNF启动子多态性分析,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了患者和正常人群血清TNF-α水平。主要观察指标:AS患者TNF基因启动子区域-308位点基因型与AS的关系。结果:AS患者中为-308.1.1基因型的有61例(78%,61/78),明显高于HLA-B27阳性的健康人(56%,29/52),差异有显著性意义(χ2=6.8,P<0.05);AS患者的-308.1.2和-308.2.2基因型频率分别为20%和1%,低于对照的38%(χ2=9.3,P<0.05)和5.8%(χ2=11.4,P<0.01)。 刘巧红 吴清敏 滕云 沈凌汛 王慧 陈燕 杨真荣关键词:脊柱炎 强直性 肿瘤坏死因子 Toll样受体4参与急性肺损伤的作用及机制 目的观察Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因突变型小鼠与野生型小鼠内毒素攻击致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的差异,分析TLR4在ALI中的作用及机制。方法... 蒋春舫 王慧 徐建波 吴河水文献传递