教育部留学回国人员科研启动基金(2010JYLH0837)
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- 米根霉As3.2686丙酮酸分支点代谢通量分析及相关酶活性研究
- 2014年
- 利用代谢通量分析(MFA)研究建立米根霉As3.2686的代谢通量方程,计算发酵罐不同通气条件下丙酮酸分支点的稳态代谢通量,并分别使用酶联免疫吸附法(ELISA)和分光光度法测定丙酮酸分支酶PDC(丙酮酸脱羧酶)、PC(丙酮酸羧化酶)、PDH(丙酮酸脱氢酶)和LDH(乳酸脱氢酶)活性变化情况。结果表明,通气量为0.5及1.0 L·(L·min)-1时苹果酸、富马酸和乙醇的通量相对较高;通气量为1.5和2.0 L·(L·min)-1时,丙酮酸分支点超过一半的流量流向L-乳酸;通气量达到2.5 L·(L·min)-1时,丙酮酸分支点流向TCA循环的稳态通量增多。比较不同通气条件下同一酶活性变化,PDC、PC和PDH的酶活性总体上都随通气量的增大先增加后减小,并且与乙醇、草酰乙酸和乙酰辅酶A的通量变化不一致;LDH和ADH变化随通气量的增加而逐渐增大,但ADH酶活性也与乙醇通量变化不一致。通气量为2.0L·(L·min)-1比1.5 L·(L·min)-1时丙酮酸分支点流向L-乳酸的通量多,但得到的胞外L-乳酸产量却较少。结果说明米根霉产L-乳酸丙酮酸分支点处单个酶的作用是有限的,多个酶都对物流起控制作用,存在其它因素间接影响丙酮酸转化L-乳酸。
- 柯玮郑志姜绍通罗水忠吴学凤杨培周李兴江
- 关键词：代谢通量分析
