北京市教育委员会科技发展计划(KZ200510020013)
- 作品数：27 被引量：75H指数：5
- 相关作者：刘云海倪和民郭勇刘烈琴杨飞鸽更多>>
- 相关机构：北京农学院北京盛世富民清真食品有限责任公司全国畜牧总站更多>>
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- 一种鉴定小鼠胚胎质量的双重荧光染色方法被引量：3
- 2008年
- 尝试改进并建立一种较可靠的、适合小鼠胚胎质量参考鉴定的双重荧光染色(细胞计数)方法。与传统方法相比,本实验中抗羊脾细胞抗血清的最佳稀释度为1∶5,作用时间为30min。豚鼠补体最佳稀释度为1∶5,两种分染染料H33342和PI的工作浓度均降低至5.3μg/ml便可着色,染色时间延长至90min,加大了染料工作液中柠檬酸钠的浓度,并在计数观察前增加压片这一步骤。染色过程中应注意避免血清物质对抗体补体的不良影响以及避光和快速的操作。双重荧光染色后小鼠胚胎内细胞团(ICM)细胞着色为蓝色,滋养层(TE)细胞着色为粉红色,数目清晰可辨。此方法可以作为一种简洁有效的小鼠胚胎质量鉴别参考方法。
- 芦天罡郭勇倪和民刘云海
- 关键词：小鼠囊胚
- 绵羊卵母细胞体外成熟过程中的线粒体分布变化被引量：2
- 2009年
- 为了检测绵羊卵母细体外成熟前后的线粒体分布变化,将成熟过程不同阶段的卵母细胞用活体细胞线粒体跟踪试剂盒(GENMED kit)对线粒体进行染色,之后用碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)对细胞核进行染色,最后用激光共聚焦显微镜观察线粒体分布情况以及相应的细胞核所处的发育时期。结果:生发泡期(Germinal Vesicle,GV)的卵母细胞线粒体呈周边分布;生发泡破裂期(Germinal Vesicle Breakdown,GVBD)、第一次减数分裂中期(MetaphaseⅠ,MI中期)的卵母细胞呈半周边分布;第一次减数分裂末期(MⅠAnaphase,MⅠ后期)的卵母细胞线粒体基本呈均匀分布,但是线粒体簇较小,着色较浅;第二次减数分裂中期(Metaphase II,MII期)的卵母细胞线粒体呈均匀分布,而且细胞质中央的线粒体簇变大,着色变深。结论:线粒体分布随着绵羊卵母细胞体外成熟阶段的进展,由细胞周边向均匀、由疏松向致密呈波动变化,这种变化有可能作为一种判定绵羊卵母细胞胞质成熟的有效参考指标。
- 曲杨燕刘云海郭勇李凯赵雁伟李晓燕倪和民
- 关键词：绵羊卵母细胞体外成熟
- 利用CTC染色比较猪精子不同体外获能方法
- 为了探讨不同方法对猪精子体外获能的影响,本实验以猪的新鲜精液为研究对象,分别经肝素上游法(swim-up)、钙离子载体(IA,A23187)诱导法和咖啡因(Caffeine)诱导法进行精子不同获能时间的处理,并利用金霉素...
- 梁鸿斌牛嘉颖李晶孙洋郭雪丹刘云海郭勇倪和民
- 关键词：精子体外获能
- 文献传递
- LH不同作用时间对牛卵母细胞体外核成熟的影响研究
- LH在卵母细胞成熟中起着重要的作用,但是在体外成熟培养中如何应用LH才能发挥其最佳的促成熟作用还存在许多的争论。所以本试验就针对这一问题在卵母细胞体外成熟的不同时间段添加LH,观察其核成熟的情况。实验1用无LH的基础成熟...
- 刘永杰夏怡金婧楠郭蕊刘云海郭勇李建红魏学良
- 关键词：卵母细胞体外成熟
- 文献传递
- 不同发情阶段的绵羊血清对绵羊精子获能和体外受精的影响被引量：1
- 2009年
- 为比较不同发情阶段和不同浓度的绵羊血清在绵羊体外受精过程中对绵羊精子体外获能及存活时间、受精效果的影响,试验以绵羊输卵管合成液(SOF)为基础获能液,在其中分别添加发情当天、发情结束和发情间期的绵羊血清,血清浓度分别为0%、2%、5%、10%和20%。利用金霉素荧光染色(CTC,chlortetracycline)法及体外受精2种方法检测不同血清及其浓度对绵羊精子获能的影响。结果表明:1)当在获能液中添加发情当天绵羊血清时,在10%和20%血清浓度下作用45 min的获能效果最好,其获能而且未完成顶体反应的精子率(45.28%和44.52%)显著高于0%、2%和5%血清浓度组(30.14%、28.71%和35.49%,P<0.05);2)当在获能液中添加发情结束时或发情间期的绵羊血清时,在含不同浓度的这2种血清的获能液中作用45 min后,各浓度组引起的获能精子百分率变化均不显著(P>0.05);3)在含20%发情当天绵羊血清的获能液中,精子的存活时间(18 h)显著高于含20%发情结束和发情间期的绵羊血清的获能液(11 h;11 h);4)在不同血清诱导获能后进行的体外受精的试验中,添加发情当天绵羊血清组的卵裂率和囊胚率(62.5%和26.25%)均显著高于发情结束时血清组(42.22%和11.11%,P<0.05)和发情间期血清组(37.36%和15.38%,P<005)。以上结果表明:在进行绵羊体外受精试验中,采用20%发情当天绵羊血清作用45 min比采用发情结束和发情间期的绵羊血清能更好地诱导精子获能。
- 刘烈琴刘云海郭勇杨飞鸽倪和民
- 关键词：绵羊精子获能体外受精
- 不同培养液及血清浓度对绵羊孤雌生殖胚胎发育的影响被引量：4
- 2007年
- 体外成熟的绵羊卵母细胞,经5μmol/L A23187 5 min和2 mmol/L 6-DMAP 4 h激活后,分别在SOFaa、M-199两种培养液中进行培养,试验比较了SOFaa、M-199液分别添加BSA和不同浓度(10%、20%)胎牛血清对绵羊孤雌生殖胚体外发育的影响。M-199+FCS组的卵裂率显著低于SOFaa+BSA和SOFaa+FCS组(P<0.05),SOFaa+BSA组的囊胚率显著低于M-199+BSA、SOFaa+FCS、M-199+FCS三组(P<0.05);SOFaa+10%FCS与SOFaa+20%FCS组的卵裂率及囊胚率均无显著差异,M-199+10%FCS和M-199+20%FCS组的卵裂率及囊胚率间均无显著差异。结果表明:SOFaa比M-199更适合绵羊孤雌生殖胚体外发育,此外添加10%的FCS即可达到较好的培养效果。
- 张宏刘云海倪和民杨飞鸽刘烈琴薛君忠郭勇
- 关键词：绵羊孤雌胚体外培养
- 利用超数排卵方法高效获取小鼠休眠胚胎被引量：3
- 2007年
- 目的为提高小鼠休眠胚胎的制备效率,尝试用超数排卵方法获取小鼠休眠胚胎。方法超排小鼠在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后,按照是否注射抗孕马血清(anti-PMSG serum或A-PMSG)以及注射的不同时间分为5组:在母鼠合笼前注射A-PMSG、在母鼠见栓后注射A-PMSG、在见栓第四天卵巢摘除手术后注射A-PMSG、不注射A-PMSG的超排组和不超排组。结果见栓后注射抗PMSG组的平均出胚数(9.4枚/只)最高,显著高于其他实验组。结论常规超排处理结合注射抗PMSG血清法能有效提高小鼠休眠胚胎的回收率。
- 芦天罡倪和民曲杨燕赵雁伟张鸿波邵丹华刘云海
- 关键词：小鼠超排卵
- FSH对绵羊卵母细胞体外核成熟的影响被引量：13
- 2008年
- 为了探讨FSH对绵羊卵母细胞核成熟的影响,本试验将绵羊卵母细胞体外成熟24 h,并在成熟过程中的4个不同时间段内添加FSH,统计各个时间段卵母细胞的生发泡破裂（germinal vesicle break down,GVBD）及第一极体排出情况。结果显示：①在体外成熟培养的前4 h或前8 h添加FSH,经体外成熟的卵母细胞其生发泡破裂率与不添加FSH组无显著差异;②在体外成熟的4-24 h或8-24 h添加FSH,其第一极体排出率与不添加FSH组有极显著差异。说明,在本试验条件下,FSH对绵羊卵母细胞体外成熟具有显著的促进作用,是在减数分裂的恢复后到减数分裂完成之间的某一阶段起的促进作用。
- 曲杨燕赵雁伟李凯刘云海郭勇倪和民
- 关键词：绵羊卵母细胞FSH体外成熟
- 不同培养时间对家猫卵母细胞核成熟的影响
- 2009年
- 为了研究不同培养时间对家猫卵母细胞核成熟的影响,以M199为基础培养液,并添加FSH、LH,分别培养24、28、32、36和43h后,观察第一极体排出,然后用地衣红染色,将排出第一极体和染色体处于MⅡ期作为卵母细胞成熟的参考判断标志。结果表明,家猫卵母细胞随着培养时间的延长其成熟率也随之增加。成熟培养43h,极体排出率极显著高于其他各组(P<0.01),达到66.89%;而24h组极体排出率为31.51%,极显著低于其他各组(P<0.01);28、32、36h各组间差异不显著(P>0.05)。经地衣红染色后,到达MⅡ期的卵母细胞比例与极体排出率趋势相同。43h组退化率极显著高于其他各组(P<0.01),达到22.30%。因此,综合考虑成熟率和退化率两项指标,28～36h为家猫卵母细胞体外核成熟的最佳培养时间。
- 邬静倪和民刘云海郭勇鲍文玉徐杨王新庄
- 关键词：家猫卵母细胞
- 稀释液中分别添加不同浓度咖啡因或谷胱甘肽对犬精液冷冻效果的影响
- 目的:研究在冷冻稀释液中分别添加不同浓度咖啡因或谷胱甘肽对犬精液冷冻效果的影响,以优化犬精液冷冻方案,提高解冻后精子质量。方法:在犬的常规精液冷冻稀释液中分别添加不同浓度咖啡因和谷胱甘肽,经细管冷冻,解冻后通过分别评价其...
- 林自力何艳芳卢婷婷孟蝶白睿峰张鑫刘云海罗桂河孟丹娜李卫东李复煌倪和民
- 关键词：冷冻精液冻精稀释液咖啡因谷胱甘肽
- 文献传递
