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白蛋白和角蛋白19双标记胚胎干细胞的建立及其向肝祖细胞的分化: 2012年; 目的建立白蛋白（Alb）和角蛋白19（CK19）双标记的胚胎干细胞系，并探讨其在肝祖细胞分化中的应用。方法构建含有Alb启动子的绿色荧光蛋白载体，并带有新霉素抗性，同时构建由CK19启动子启动红色荧光的载体，带有潮霉素抗性；将构建好的载体线性化后，同时电转胚胎干细胞E14.1，利用新霉素和潮霉素双筛选后，建立双标记基因修饰胚胎干细胞系E14．1—2；通过拟胚体形成及生长因子（骨形态发生蛋白4和碱性成纤维细胞生长因子）刺激的方法诱导产生肝祖细胞，经过流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应检测诱导效率。结果构建了含有Alb启动子启动绿色荧光和CK19启动子启动红色荧光的载体，并证明了Alb和CK19启动子能特异启动各自蛋白的表达}建立了Alb和CK19双标记胚胎细胞系，并证明其具有多能性，显著表达多能性基因八聚体结合转录因子4和阶段特异性胚胎抗原1，在E14．1—2诱导分化22d后通过流式细胞术分选成功得到21．27％Alb和CK19双阳性的肝祖细胞。结论双标记胚胎干细胞的建立可以纯化和定量肝祖细胞，便于改进肝向诱导的方法及研究肝祖细胞特性。; 兰勇李阳芳李大军韦军民王欣胡以平; 关键词：胚胎干细胞白蛋白类角蛋白19

血清和无血清诱导方法分化小鼠胚胎干细胞为定形内胚层的比较被引量：1: 2013年; 目的比较两种方法(血清诱导方法和无血清诱导方法)诱导小鼠胚胎干细胞分化为定形内胚层细胞的效率。方法利用血清诱导法和无血清诱导法分别诱导分化小鼠胚胎干细胞,根据定形内胚层表面标记蛋白(Cxcr4、c-Kit和E-cadherin)的表达,通过流式细胞术分析定形内胚层诱导的时间及效率,并利用RT-PCR检测两种方法诱导的定形内胚层基因表达谱;同时利用荧光定量PCR检测无血清诱导过程中内胚层基因的表达情况;利用流式细胞术分选Cxcr4和c-Kit双阳性细胞进行定形内胚层基因表达的鉴定。结果血清诱导法和无血清诱导法都能够将胚胎干细胞诱导分化为定形内胚层,其中无血清组的诱导效率高于血清组,高达74.19%,并且在诱导的第4天就能到达峰值。结论建立了高效快捷的诱导胚胎干细胞分化为定形内胚层细胞的方法,为进一步向肝、胰等组织细胞诱导打下了基础。; 李阳芳兰勇张亚卓王欣胡以平; 关键词：胚胎干细胞细胞分化血清

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国家自然科学基金(30671044C07)