博士科研启动基金(SWU110036)
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- 基于报告基因和核糖体工程的达托霉素高产菌株筛选体系的建立和应用
- 达托霉素(daptomycin)是由玫瑰孢链霉菌产生的一种新型环脂肽抗生素,临床上用于治疗革兰氏阳性菌包括耐药菌导致的感染。选育达托霉素的高产菌株对降低该抗生素的生产成本,实现大规模生产有重要的意义。我们综合采用了能方便...
- 王磊胡昌华廖国建
- 关键词：达托霉素报告基因
- 文献传递
- 玫瑰孢链霉菌SWU2010遗传转化体系的建立和优化
- 2013年
- 玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)是近几年备受关注的抗生素—达托霉素(Daptomycin)的产生菌,具有重要的研究价值和应用前景.目的:为了对Streptomyces roseosporus中的功能基因进行研究,构建达托霉素高产菌株,需要建立一种稳定、高效的遗传转化体系.方法:以pSET152和pKC1139为载体,探索优化了S.roseosporus SWU2010与大肠杆菌进行接合转移的条件,以此为基础将体外构建的ploxP质粒和带有cre重组酶基因的质粒pALcre先后转入S.roseosporus SWU2010中.结果:AS-1培养基是接合转移的最佳培养基;孢子的预萌发条件为50℃热激10 min,转化效率达10-6～10-5.另外,抗生素覆盖时间16～18 h效果最好.利用已建立的接合转移体系,成功将两侧带有loxP位点的安普霉素抗性基因成功敲除.实验结果为进一步研究达托霉素的生物合成基因和对达托霉素进行组合生物合成改造奠定了基础.
- 马廷梅柳青王磊胡昌华廖国建
- 关键词：CRELOXP
