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江苏省自然科学基金(BK2012751)
作品数:
1
被引量:6
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相关作者:
张晓良
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高民
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2013
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高糖诱导人主动脉内皮细胞-软骨转分化
被引量:6
2013年
目的探讨高糖刺激内皮细胞表型改变后是否诱导其分化为多能干细胞,再进一步分化成软骨细胞,从而介导血管钙化的形成。方法人主动脉内皮细胞(HAEC)被随机分成3组:正常对照组(NG,5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,30mmol/L葡萄糖)和甘露醇对照组(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇),培养48h。激光共聚焦显微镜观察CD31和成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)在人主动脉内皮细胞的表达。实时定量PCR和Western印迹法检测细胞CD31及FSP1基因和蛋白的表达。再使用软骨细胞培养基对高糖刺激的人主动脉内皮细胞进行1周诱导分化,实时定量PCR和Western印迹法检测细胞CD10和CD44基因和蛋白的表达,免疫荧光法检测间充质干细胞标志物CD44和STRO-1的表达;阿辛蓝染色和Western印迹法鉴定软骨细胞和其标志物SOX9的表达。电镜观察细胞形态变化。结果高糖干预后,CD31的蛋白和mRNA表达水平下降(P〈0.01),FSP1的蛋白和mRNA表达水平增加(P〈0.01);激光共聚焦显微镜可见CD31和FSP1表达重叠,一些细胞呈纺锤样改变并CD31染色阴性。经软骨细胞培养基诱导分化1周后,多能干细胞标志物CD44、CD10的蛋白和mRNA表达水平显著高于正常对照组(P〈0.01);共聚焦显微镜提示,间充质干细胞标志物STRO-1表达亦显著高于正常对照组;高糖组细胞SOX9蛋白和基因表达水平显著高于正常对照组(P〈0.01);细胞阿辛蓝和茜素红染色阳性;电镜显示高糖使细胞粗面内质网和微丝明显增多。结论高糖可诱导HAEC发生内皮.间充质转分化,并获得多能干细胞表型,在合适的诱导环境下分化为软骨细胞,参与糖尿病肾病心血管钙化的发生和发展。
汤日宁
伍敏
刘宏
高民
张晓良
刘必成
关键词:
细胞转分化
间质干细胞
软骨
钙质沉着症
高糖
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