国际科技合作与交流专项项目(2005DFA30720)
- 作品数：32 被引量：134H指数：7
- 相关作者：赵兴绪张勇杨永新曹随忠陶金忠更多>>
- 相关机构：甘肃农业大学四川农业大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金四川省教育厅青年基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 奶牛β-防御素5基因的克隆与原核表达被引量：7
- 2009年
- 根据已发表的β-防御素5基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增奶牛白细胞β-防御素5基因片段,构建原核表达载体并进行诱导表达.结果表明:将PCR产物插入pGEM-T easy载体后,经琼脂糖凝胶电泳、PCR、酶切及DNA测序证明构建的重组克隆载体完全正确,以该重组质粒为模板扩增目的基因的成熟肽片段,产物用EcoR I+NotⅠ双酶切并与原核表达载体PET28a连接,获得了预期的重组表达质粒.将重组表达质粒转化到BL21(DE3)宿主菌中,用异丙基--βD-硫代半乳糖苷诱导表达,经尿素-SDS-PAGE检测表明表达产物为6.4 kda的融合蛋白.
- 周雷张勇王建锋赵兴绪
- 关键词：奶牛基因克隆原核表达
- 奶牛乳房炎乳腺膜蛋白的比较蛋白质组学研究被引量：8
- 2010年
- 【目的】通过分析临床健康和乳房炎奶牛乳腺组织膜蛋白的差异表达,以期在蛋白质水平探索奶牛乳房炎的发生机理。【方法】采用二维凝胶电泳技术分离了临床健康和乳房炎奶牛的乳腺组织膜蛋白,经考马斯亮蓝染色后PDQuest 7.4软件匹配、检测凝胶中差异表达的蛋白点,对12个差异蛋白点采用高效液相色谱串联离子阱质谱分析,SEQUEST软件搜索NCBInr数据库。半定量RT-PCR分析差异表达蛋白的mRNA水平。【结果】12个差异蛋白点鉴定为11种蛋白质,其中9个蛋白点在临床型乳房炎奶牛乳腺组织膜蛋白中表达量上调而3个蛋白点表达量下调,主要涉及细胞膜骨架系统、信号转导、物质结合和传递等生物学功能。半定量RT-PCR分析表明,乳房炎奶牛乳腺组织中钙粒蛋白B的mRNA表达水平是健康奶牛的1.6倍。【结论】推测这些差异蛋白的表达变化与奶牛乳房炎发生相关,为从蛋白质水平揭示奶牛乳房炎的发生机理以及发现潜在的治疗目标蛋白提供了理论依据。
- 杨永新张勇周雷程广龙陶金忠赵兴绪
- 关键词：奶牛乳房炎蛋白质组
- 绵羊精子冻融前后差异蛋白质组学研究被引量：5
- 2011年
- 【目的】检测和分析绵羊精子冻融前后的差异蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离精子蛋白,凝胶用考马斯亮蓝染色,用PDQuest8.0软件检测分析差异蛋白质斑点并经液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】鲜冻精凝胶图谱分析后得到14个差异蛋白斑点,在国际生物信息学中心数据库搜索到相对应的5种蛋白质:推定的热休克蛋白70.1、转录因子AP-2α蛋白、烯醇酶、烯醇酶1和血清白蛋白前体。在解冻精子中,推定的热休克蛋白70.1、烯醇酶和烯醇酶1含量减少,转录因子AP-2α蛋白含量增加,血清白蛋白前体来源于精浆。【结论】绵羊精子经冷冻、解冻后,蛋白质存在差异,对差异蛋白质的研究有利于探索绵羊精子在冷冻过程中的生理状态,为进一步研究绵羊精子蛋白质组学及揭示精子冻伤机理提供依据。
- 李鸿岩赵兴绪张勇贺钰烜杨永新
- 关键词：绵羊蛋白质组
- 乳房炎奶牛乳汁体细胞数与乳汁HP、SAA和AGP水平关系的研究被引量：13
- 2008年
- 对8头正常奶牛和22头自发性乳房炎奶牛的混合乳汁中血清淀粉样蛋白(SAA)、结合珠蛋白(HP)、α1-酸性糖蛋白(AGP)水平和乳汁体细胞数(SCC)的关系进行了研究.结果表明:乳房炎奶牛与正常奶牛乳汁中HP水平差异显著(P<0.05),与乳汁SCC存在极显著正相关关系(P=0.000,r=0.406);乳房炎奶牛与正常奶牛乳汁中SAA和AGP的差异不明显(P>0.05),而且与乳汁SCC的相关性也均不显著,说明乳汁HP水平能反映奶牛乳腺感染的严重程度.
- 伍涛赵兴绪
- 关键词：SCCSAAHPAGP奶牛乳房炎
- 奶牛乳腺组织蛋白质样品的制备及2-DE图谱分析被引量：8
- 2007年
- 本研究以奶牛乳腺组织为对象,采用了普通离心、超速离心、2-D clean-up kit和TCA/丙酮沉淀方法制备蛋白质样品,经二维凝胶电泳(2-DE)获得蛋白表达图谱。根据凝胶图谱上蛋白质斑点判断图谱的质量,并运用PDQuest7.4软件分析图谱。结果显示:普通离心法制备的蛋白样品的凝胶图谱蛋白质斑点较为清晰,但横向条纹较多;超速离心法纯化蛋白样品的图谱,蛋白斑点清晰且可检测到较多的斑点;TCA/丙酮沉淀和2-D clean-up kit方法纯化蛋白样品的凝胶图谱条纹减少,蛋白斑点清晰,但可检测到的斑点数量有所减少。研究表明,超速离心方法纯化的蛋白质样品适合建立奶牛乳腺组织的蛋白质表达图谱。
- 杨永新陶金忠张勇曹随忠赵兴绪
- 关键词：奶牛乳腺组织二维凝胶电泳蛋白质组学
- 绵羊卵母细胞蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析被引量：1
- 2011年
- [目的]获得绵羊卵母细胞蛋白质组表达图谱。[方法]采用直接裂解法制备卵母细胞蛋白样品,采用Bradford法和Ramagli法测定绵羊卵母细胞蛋白质样品的浓度,并进行双向凝胶电泳,运用PDQuest8.0对2-DE图谱进行初步分析。[结果]Ramagli法能更准确地测定绵羊卵母细胞蛋白质样品的浓度,从而优化样品的上样量,得到更高质量的2-DE图谱;Bradford法测得的绵羊卵母细胞蛋白质浓度偏高。[结论]700个卵母细胞的上样量比较合理,可用于构建卵母细胞蛋白质组2-DE图谱。
- 林雍峰张勇李鸿岩胡俊杰赵兴绪
- 关键词：绵羊卵母细胞双向电泳蛋白质组
- 蛋白质组学及其在奶牛乳房炎研究中的应用被引量：6
- 2006年
- 蛋白质组学是功能基因组学的重要组成部分,已被广泛应用于人类疾病等相关研究领域。二维凝胶电泳、质谱和生物信息学是蛋白质组学研究的三大关键技术。文章概述了蛋白质组学研究技术的最新进展和白细胞蛋白质组学、微生物蛋白质组学、差异蛋白质组学的研究进展,以及蛋白质组学在奶牛乳房炎发病机理、诊断和防治等相关研究中的应用与前景。
- 曹随忠杨永新李宏滨杜立新赵兴绪
- 关键词：蛋白质组学功能基因组学奶牛乳房炎
- 亚细胞蛋白质组学研究进展被引量：5
- 2009年
- 亚细胞蛋白质组是蛋白质组学研究的新领域,是目前研究疾病发病机理的有效手段,研究的主要内容包括亚细胞结构的分级分离、纯化以及蛋白质组分析,目前几乎所有的亚细胞结构的蛋白质组学研究都有报道.本文就快速发展的亚细胞蛋白质组学以及揭示的生物学意义作以综述.
- 王建锋赵兴绪
- 关键词：蛋白质组
- 临床型乳房炎与正常奶牛血浆的差异蛋白质组研究被引量：15
- 2008年
- 【目的】检测和分析临床型乳房炎与正常奶牛血浆中差异表达的蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离血浆蛋白,凝胶用硝酸银染色和考马斯亮蓝染色,PDQuest7.4软件自动检测分析差异表达蛋白斑点并经高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】凝胶图谱分析后得到3个差异蛋白斑点,鉴定为2种蛋白质(结合珠蛋白前体和乳腺球蛋白)。结合珠蛋白前体在临床型乳房炎奶牛血浆中表达量增加,可作为乳房炎诊断标记分子;而乳腺球蛋白的表达量下调。【结论】临床型乳房炎与正常奶牛的血浆中蛋白质的表达存在差异,对差异表达蛋白质的研究有利于探索机体的生理病理状态,可为疾病的诊断和治疗提供全面的信息。
- 杨永新赵兴绪张勇陶金忠
- 关键词：奶牛临床型乳房炎血浆差异表达蛋白质
- 奶牛乳房炎抗性相关基因Znf313的电子克隆与序列分析被引量：8
- 2007年
- 电子克隆是基因克隆的新策略。利用一个患乳房炎奶牛外周血白细胞中差异表达的EST序列为信息探针进行电子克隆,根据电子克隆序列设计引物,以奶牛外周血白细胞cDNA为模板进行RT-PCR验证,PCR产物克隆入pGEM-T质粒载体,测序得到的序列已被GenBank收录(DQ010409)。该基因被命名为牛锌指蛋白313(Znf313)基因,开放阅读框1～693bp,推测编码230个氨基酸,预测其编码蛋白分子量为25.67kD,等电点6.90。
- 曹随忠李宏滨姚学萍赵兴绪杜立新
- 关键词：电子克隆生物信息学
