诺如病毒(norovirus,NVs)是非细菌性急性胃肠炎的主要病原,严重地威胁着婴幼儿、老年人和公共场所人群的健康。疫苗是目前临床预防由NVs引发急性胃肠炎的主要策略之一。按番茄偏爱密码子设计合成编码诺如病毒(VA387)衣壳蛋白——P粒子基因PGENE(1 002bp),为便于纯化,PGENE的5'端包含编码6×his-tag的DNA序列;构建原核表达载体PET32a-PGENE并导入BL21。在16℃条件下,用终浓度1mmol/L的IPTG(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析法纯化获得P粒子,并通过Western blot加以确认;在透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)下观察到了球形P粒子成功组装;用该蛋白免疫小鼠,成功获得了活性的抗体血清。为后续用番茄研制口服诺如病毒疫苗奠定了基础。
