广东省自然科学基金(04011645)
- 作品数：11 被引量：63H指数：4
- 相关作者：唐冬生蒋泓周天鸿张细权李月琴更多>>
- 相关机构：暨南大学华南农业大学佛山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 基于BAC重组酶系统构建莱航鸡多位点基因打靶载体的研究被引量：4
- 2007年
- 以莱航鸡重复的rDNA基因间的间隔序列为靶位点,利用BAC重组酶系统构建含人干扰素基因的多位点基因打靶载体,为建立莱航鸡多位点基因打靶技术获得关键材料。首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GID表达载体。将BAC-TDN筛选载体和pYLVS-GID表达载体共转化至大肠杆菌NS3529中,通过其Cre重组酶的作用形成BAC-TDN-VS-GID质粒,采用归位内切酶I-SceⅠ切除pYLVS质粒骨架,利用接头LS使之环化,构建成莱航鸡大容量多位点基因打靶载体BAC-TDN-GID。每次克隆均经酶切或PCR、测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向。以该载体为材料的多位点基因打靶技术将提高基因定点整合效率,解决外源基因不能稳定表达、安全性等部分问题,突破了DNA重复序列不能作为外源基因整合靶位点的禁区。
- 唐冬生李芳蒋泓胡大林张细权李月琴周天鸿
- 关键词：基因打靶细菌人工染色体
- 高GC含量的鳜鱼rRNA基因家族的克隆被引量：11
- 2005年
- 动物rRNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。该研究结合亲缘生物法生物信息学技术,经反复摸索后选用LA PCR法即LA PCR Taq酶结合GC缓冲液来扩增鳜鱼复杂的rRNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了鳜鱼的3个rRNA基因及其2个间隔序列。分析了鳜鱼与相关动物的rRNA基因序列的同源性和进化关系。探索了克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等措施。
- 唐冬生严霞张勇张细权李芳蒋泓李月琴周天鸿
- 关键词：RRNA基因高GC含量鳜鱼RRNA基因序列GC含量克隆基因家族
- 梁子湖三种鲌肉质分析被引量：31
- 2005年
- 通过对梁子湖翘嘴鲌、青梢鲌和蒙古鲌的肌肉加工指标和生化成分分析,结果表明:翘嘴鲌的系水力、谷氨 酸、脯氨酸、甘氨酸、非必需氨基酸和鲜味氨基酸含量皆高于蒙古鲌,存在显著性差异(P<0．05);翘嘴鲌的比能值 小于蒙古鲌,差异显著(P<0．05);翘嘴鲌的熟肉率和水分含量高于蒙古鲌,差异极显著(P<0．01),翘嘴鲌的贮存 损失低于蒙古鲌,差异极显著(P<0．01):翘嘴鲌的谷氨酸和鲜味氨基酸含量高于青梢鲌,差异显著(P<0．05)。青 梢鲌的熟肉率、脯氨酸、水分含量高于蒙古鲌,差异显著(P<0．05),青梢鲌的贮存损失低于蒙古鲌,差异极显著 (P<0．01);其他指标差异均不显著(P>0．05)。三种鲌肌肉中17种氨基酸总量依次为78．10、76．63和75．26,必需 氨基酸指数依次为66．25、65．95和64．97。缬氨酸和异亮氨酸分别为第一、第二限制性氨基酸。综合分析,翘嘴鲌 的肉质优于青梢鲌和蒙古鲌。
- 于辉李华刘为民蒋岸岸唐冬生
- 关键词：肉质
- 莱航鸡rDNA重复基因家族的克隆
- 2007年
- 动物rDNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。通过结合生物信息学技术,经反复摸索后选用LAPCR法扩增莱航鸡rDNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了莱航鸡的3个rDNA基因及其2个间隔序列。研究对克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等进行了探索。
- 唐冬生李芳张勇蒋泓胡大林张细权李月琴周天鸿
- 关键词：RDNA基因基因克隆
- 奶牛胎儿细胞多位点基因打靶的研究被引量：4
- 2008年
- 利用奶牛rDNA基因间的ITS重复序列作为靶位点,对奶牛胎儿成纤维细胞进行多位点基因打靶,建立以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术,并为克隆定点转基因奶牛提供核供体。首先分离培养出奶牛胎儿成纤维细胞,并进行性别鉴定和核型分析。采用MTT比色法确定了G418和GCV正负筛选的最低有效浓度。然后通过多位点基因打靶载体转染、正负筛选获得7个表达绿色荧光的克隆细胞系,经PCR,RT-PCR和测序证实其中1个细胞系为定点整合的克隆细胞系,且GFP基因表达。
- 唐冬生刘广振刘东军蒋泓龚道元马玉珍杨东山梁浩张细权
- 关键词：奶牛胎儿成纤维细胞基因打靶
- 通过PCR技术简单扩增奶牛高GC含量的rDNA重复序列被引量：6
- 2005年
- 为了探索利用PCR简单扩增高GC含量的长重复序列的方法,经反复摸索后选用LAPCR法即LAPCRTaq酶结合GC缓冲液Ⅱ来扩增奶牛高GC含量的长片段重复序列,成功获得了全长2538bp,GC含量为65.7%的DNA序列,其中ITS1的GC含量高达80%.探索了克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用等措施.
- 王波唐冬生蒋泓洪亚辉萧浪涛周天鸿
- 关键词：高GC含量核糖体DNA聚合酶链反应奶牛
- 基于生物信息学的鳜鱼基因知识发现被引量：1
- 2005年
- 以鳜鱼基因克隆为例,揭示了基于生物信息学的知识发现的全过程。利用Entrez、SRS等检索工具从GenBank、EMBL等核酸序列数据库、鱼类专业数据库获取相关鱼类的基因等信息,采用半经验值直观算法,以BLAST、FASTA方法结合Taxonomy分类数据库,选择恰当的过滤程序过滤掉效数据,最终获得与知识发现预期结果一致知识。
- 邓菲
- 关键词：知识发现生物信息学数据库基因
- 通用型奶牛多位点基因打靶载体系统的构建被引量：4
- 2006年
- 以奶牛为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点,基于BAC重组酶系统构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料.首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GD表达载体.将BAC-TDN筛选载体和pYLVS-GD表达载体共转化至大肠杆菌NS3529中,通过Cre重组酶的作用形成BAC-TDN-VS-GD质粒,采用归位内切酶I-SceI切除pYLVS载体骨架,构建奶牛多位点基因打靶载体BAC-TDN-GD,利用接头LS使之环化.BAC-TDN-GD打靶载体与pYLSV质粒组成了通用型奶牛多位点打靶载体系统.以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术,将部分解决目前存在的打靶效率低、安全性差等问题.
- 蒋泓唐冬生李月琴张欣李芳胥斯卡周天鸿
- 关键词：基因打靶细菌人工染色体奶牛
- 以重复序列为靶位点的鳜鱼多位点基因打靶载体的构建被引量：3
- 2005年
- 以鳜鱼(Sinipercachuatsi)为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料。先构建含TK和Neo基因的通用打靶载体pCTKNeo。采用LATaq高保真酶扩增获得左、右同源重组引导臂HRDS1、HRDS2,经T质粒克隆后,分别插入到pCTKNeo载体Neo基因的上下游,构建成鳜鱼专用的多位点打靶载体pCTKNeoHRDS1/2。同样将干扰素基因hIFN插入到pCTKNeoHRDS1/2载体的Neo基因与HDRS2之间。每次克隆均经PCR、酶切和测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向,最终构建成多位点基因打靶载体pCTKNeoHRDS1/2hIFN。目前的基因打靶技术存在打靶效率低、安全性等问题,以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术将部分解决这些问题。
- 唐冬生严霞李芳张细权蒋泓于辉高东李月琴周天鸿
- 关键词：基因打靶鳜鱼
- 暗纹东方鲀胃蛋白酶的分离纯化及部分性质研究被引量：8
- 2004年
- 为了探明 pH 值、温度及矿物质离子对暗纹东方鲀胃蛋白酶活性的影响效果,用暗纹东方鲀的胃为材料,经柠檬酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,CM-纤维素离子交换柱、Sephedex G75 层析柱纯化,获得比活为 7.13μmol/(min·mg)的胃蛋白酶.酶经聚丙烯酰胺电泳,表现为单一蛋白带,经 SDS-PAGE 测得酶的亚基相对分子质量为18 600.酶水解酪蛋白的最适温度为50 ℃,在pH2.5, ℃下酶催化酪蛋白水解的Km值为0.715 mmol/L;pH5.0, 3737 ℃下酶催化 N-卞氧羰酰 L-赖氨酸对-硝基酚酯(CBZ-Lys.pNP)的 Km 值为 0.112 mmol/L.几种矿物质离子对酶活力的影响表明,Ca2+,Mn2+,Mg2+对酶有激活作用,Zn2+,Fe2+对酶有抑制作用.
- 张继平郭照良唐冬生陈建酬贺顺莲
- 关键词：暗纹东方鲀胃蛋白酶纯化
