南京医科大学科技发展基金(08NMUZ007)
- 作品数:1 被引量:0H指数:0
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- 发文基金:中国博士后科学基金江苏省博士后科研资助计划项目江苏省自然科学基金更多>>
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- 人催乳素受体胞外区蛋白的原核表达及纯化
- 2010年
- 目的:建立人催乳素受体的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:由RT-PCR获得人催乳素受体(human prolactin receptor,hPRLR)胞外区氨基酸的编码序列,扩增并通过酶切位点修饰后克隆至pMD18-T载体,经测序正确后,切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG诱导重组工程菌表达,使用谷胱甘肽偶联的GSTrapFF柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-hPRLR融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为37.6×103处有一条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-hPRLR融合蛋白,为进一步研究催乳素受体的功能和制备特异性的抗体奠定了基础。
- 刘雪瑶鲁雅洁屈芫姚俊魏钦俊曹新冯振卿
- 关键词:融合蛋白原核表达纯化