贵州省优秀科技教育人才省长资金项目(2009047)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：葛正龙赵学发杨名慧姜婧怡李长福更多>>
- 相关机构：遵义医学院遵义医学院附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 紫外线照射对SD大鼠晶状体上皮细胞p53、Bax、Bcl-2表达的影响被引量：7
- 2017年
- 目的探讨p53、Bax、Bcl-2基因在紫外线诱导晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)凋亡中的作用。方法 6周龄SD大鼠40只随机分为对照组和实验组,对照组不做处理,实验组腹腔注射100 g·L-1水合氯醛(0.35 mL/100 g),以波长为300~320 nm的紫外线照射眼球15 min,分别于紫外线照射后1、3、5、7 d处死并取出晶状体。Hoechst33258染色法观察LEC的形态变化,实时定量PCR及免疫组织化学检测p53、Bax、Bcl-2mRNA和蛋白在LEC中表达水平。结果紫外线照射后晶状体发生混浊,其LEC发生凋亡,细胞排列不规则、大小不一。实时定量PCR检测结果显示,与对照组相比,紫外线照射后1 d Bax mRNA表达水平升高(P<0.05),照射后3、5、7 d Bax和p53 mRNA表达水平均升高(均为P<0.01);与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达水平在照射后1 d降低(P<0.01),而照射后5 d和7 d则升高(均为P<0.01)。紫外线照射后p53与Bax mRNA相对表达水平的变化呈正相关(r=0.952,P<0.01)。免疫组织化学结果显示,紫外线照射后LEC中p53和Bax蛋白表达逐渐增强,且由细胞质向细胞核转移;相反照射后1 d Bcl-2蛋白表达降低,而3、5、7 d则逐渐增高。结论紫外线诱导LEC凋亡与p53介导Bax/Bcl-2的表达调控有关。
- 赵学发杨名慧葛正龙
- 关键词：紫外线晶状体上皮细胞P53BAX
- αA晶体蛋白基因启动子与HSP70融合基因表达载体的构建及鉴定被引量：4
- 2013年
- 目的构建αA晶体蛋白基因启动子与HSP70融合基因表达载体pαACP-HSP70。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术,从质粒pIRES2-EGFP-HSP70中扩增HSP70基因,将已构建的含αA晶状体蛋白基因特异性启动子活性片段(αACP)的质粒pαACP-IRES2-EGFP双酶切,回收载体片段,利用基因重组技术,将HSP70基因片段定向插入载体启动子αACP之后,构建特异性表达载体,命名为pαACP-HSP70,并通过PCR、酶切和DNA测序进行鉴定。结果构建的pαACP-HSP70质粒通过酶切图谱鉴定、PCR检测有1924 bp条带出现,通过测序显示所克隆的HSP70基因与基因库中的同种序列比较,核苷酸序列有100%的同源性。结论成功构建了晶状体上皮细胞特异性表达载体pαACP-HSP70。
- 姜婧怡葛正龙
- 关键词：基因表达HSP70基因治疗
- 重组质粒pαACP-HSP70对半乳糖诱导大鼠晶状体Smac基因表达的影响
- 2019年
- 目的探讨重组质粒pαACP-HSP70对半乳糖诱导大鼠晶状体组织Smac mRNA水平和蛋白水平影响。方法将大鼠晶状体组织培养6h后,选取透明27只晶状体组织随机分为空白对照组、半乳糖组、半乳糖+重组质粒pαACP-HSP70组(简称α-70组),每组9只;用阳离子脂质体转染法将重组质粒pαACP-HSP70质粒导入α-70组;荧光显微镜下观察重组质粒pαACP-HSP70在晶状体组织的表达情况;Real-time PCR检测各组HSP70、Smac的mRNA水平; Western blot检测各组HSP70、Smac蛋白表达。结果α-70组转染重组质粒pαACP-HSP70后,与空白对照组、半乳糖组相比,晶状体有绿色荧光蛋白表达,HSP70 mRNA、蛋白水平上调,Smac的mRNA、蛋白水平下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论重组质粒pαACP-HSP70成功转入晶状体组织并上调HSP70基因表达,抑制Smac基因表达。
- 杨名慧范芳李长福赵学发葛正龙
- 关键词：半乳糖HSP70SMAC
- 紫外线照射对大鼠白内障晶状体HSP70表达的影响
- 2015年
- 白内障是世界首位致盲疾病，流行病学调查和实验研究均显示白内障的发生与紫外线照射关系密切［1］，尤其中波紫外线（290320 nm ）能够穿过角膜，被晶状体所吸收，是紫外线诱导白内障发生的重要因素［2］。紫外线照射可产生大量的活性氧化簇（Reactive oxygen species ，ROS），氧化损伤DNA［3］及晶状体上皮细胞［4 ］，使晶状体产生渗透性膨胀，不溶性蛋白质增加，从而诱导白内障的发生。热休克蛋白（heat shock proteins ，HSPs）作为一种在进化上高度保守的应激蛋白，具有分子伴侣活性，可帮助蛋白质的正确折叠，保护它们免遭应激损害，帮助变性的蛋白质复性。其中 HSP70是热休克蛋白家族中最重要的一种，其在稳定蛋白质的天然构象、保护细胞、抗氧化等方面具有重要作用。本实验通过紫外线照射SD大鼠眼球，旨在观察 HSP70在晶状体上皮细胞中的表达变化，为探究H S P70在紫外线诱导白内障发生中的作用提供实验基础。
- 赵学发杨名慧葛正龙
- 关键词：HSP70紫外线晶状体白内障
