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钙转运蛋白Gdt1过表达对酿酒酵母蛋白酶A胞外分泌的影响: 2020年; 啤酒泡沫稳定性是评估啤酒质量的一个关键因素,发酵液中的蛋白酶A会影响啤酒的泡沫稳定性。通过过表达钙转运蛋白Gdt1促进蛋白酶A的液泡分选的方法,达到减弱酿酒酵母向细胞外分泌蛋白酶A的目的。以酿酒酵母菌株W303-1A为亲本菌株,通过同源重组依赖型DNA装配方法构建Gdt1过表达菌株,然后将Gdt1过表达菌株和亲本菌株在相同的低氮胁迫条件下进行发酵,测定其胞内外的蛋白酶A活力以及基本发酵性能。研究结果表明:发酵结束时,Gdt1过表达菌株的胞内蛋白酶A活力较亲本菌株提高了12.59%,胞外蛋白酶A活力较亲本菌株降低了18.81%;同时,过表达Gdt1没有影响菌株的基本发酵性能。研究揭示了一种有效的降低蛋白酶A的胞外分泌的方法,为筛选低蛋白酶A胞外分泌菌株提供了理论参考。; 宋露露刘小航郭学武陈叶福肖冬光; 关键词：啤酒泡沫蛋白酶A

过表达 EHT1 基因对酿酒酵母己酸乙酯生产能力的影响被引量：15: 2014年; 为了提高酿酒酵母己酸乙酯的产量,缩短浓香型白酒的发酵周期,降低生产粮耗。对酿酒酵母醇己酰基转移酶(ethanol hexanoyl transferase I)基因EHT1进行了过表达,研究其对酿酒酵母己酸乙酯生产性能的影响。以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子为上游调控元件,KanMX抗性基因为筛选标记构建了酵母菌表达质粒Yep-PEK,经醋酸锂转化和G418抗性筛选鉴定获得过表达EHT1基因的突变株AY-PEK。经玉米原料液态白酒发酵后,实验结果显示突变株的生长速度、发酵速度、酒精度等基本发酵性能没有明显变化,但己酸乙酯的产量提高为原菌种的2.21倍,辛酸乙酯和癸酸乙酯也分别提高了31.4%和49.1%。当加入等量的己酸模仿实际发酵过程中己酸菌提供己酸时,己酸乙酯的量提高为原菌种的近3倍,总酯也相应的提高了32.2%。EHT1基因的过表达对提高酿酒酵母产酯性能,特别是产己酸乙酯有显著作用。; 李锋陈叶福郭建郭学武肖冬光; 关键词：中国白酒酿酒酵母己酸乙酯

酵母蛋白酶A活性中心突变对蛋白酶A酶活力及菌株生长情况的影响: 2013年; 蛋白酶A由PEP4基因编码,对酿酒酵母的生理生化功能起到重要的作用,蛋白酶A缺失或低表达对于理论研究和实际应用都具有重要价值。利用重叠延伸法构建了蛋白酶A第294位活性中心突变的PEP4基因表达载体,同时构建了野生型PEP4基因表达载体,并分别将两种表达载体转化到基因背景为PEP4缺失的菌株中。研究发现,蛋白酶A活性中心点突变的重组菌株与蛋白酶A缺失的重组菌株在细胞内外均不能检测到蛋白酶A活力,而转化野生型表达载体的菌株蛋白酶A活力与出发菌株基本一致。结果表明,活性中心点突变与基因完全缺失对菌株的影响一致;通过生长曲线的观察发现蛋白酶A活性中心点突变会导致生长速率的减慢。本研究对于工业菌株无痕敲除、提高应用安全性方面具有理论指导意义。; 卢君吴德光陈叶福肖冬光; 关键词：蛋白酶A 点突变重叠延伸PCR

酵母蛋白酶A活性中心突变对蛋白酶A酶活力及菌株生长情况的影响: 2014年; 蛋白酶 A 由 PEP4 基因编码，对酿酒酵母的生理生化功能起到重要的作用，蛋白酶 A 缺失或低表达对于理论研究和实际应用都具有重要价值。本文利用重叠延伸法构建了蛋白酶 A 第 294 位活性中心突变的 PEP4 基因表达载体。同时构建了野生型 PEP4 基因表达载体，并分别将两种表达载体转化到基因背景为 PEP4 缺失的菌株中。研究发现蛋白酶 A活性中心点突变的重组菌株与蛋白酶 A 缺失的重组菌株在细胞内外均不能检测到蛋白酶 A活力，而转化野生型表达载体的菌株蛋白酶 A 活力与出发菌株基本一致。结果表明，活性中心点突变与基因完全缺失对菌株的影响一致。通过生长曲线的观察发现蛋白酶 A 活性中心点突变会导致生长速率的减慢。本研究对于工业菌株无痕敲除，提高应用安全性方面具有理论指导意义。; 卢君吴德光陈叶福肖冬光; 关键词：蛋白酶点突变 PCR

高浓高温对啤酒酵母发酵性能的影响被引量：18: 2016年; 以啤酒酵母S-6为实验菌株，研究了主发酵温度和原麦汁浓度对啤酒发酵的残糖、酒精度、风味物质和絮凝性等性能指标的影响。结果表明，原麦汁浓度一定时，主发酵温度对高级醇和乙酸酯的含量影响较大，主发酵温度由10℃提高至16℃时，高级醇含量提高了10％～20％，乙酸酯含量提高了8％～16％，但CO2累积质量损失、残糖、酒精度和絮凝性基本不受温度的影响；主发酵温度一定时，原麦汁浓度对酵母絮凝性影响较大，原麦汁浓度越高，酵母絮凝性越低，将高浓（18°Bx）发酵液稀释50％至常浓（12°Bx），残糖、酒精度和高级醇的含量与常浓发酵液基本相同。该研究为选育高温高浓发酵低产高级醇同时强絮凝性酵母菌株提供了重要依据。; 周波张翠英陈叶福石婷婷刘小二肖冬光; 关键词：高浓发酵高温发酵高级醇

酿酒酵母蛋白酶A外泌与酒类酿造被引量：1: 2013年; 蛋白酶A(EC 3.4.23.6)是酿酒酵母中重要的蛋白酶,与酶原激活、生孢等多种生理功能密切相关.在酒类酿造过程中往往会发生蛋白酶A外泌进而影响发酵产品质量的现象.研究胁迫条件下蛋白酶A的外泌及其调控机制,对于酿酒酵母菌种选育和酒类产品质量控制具有重要的理论指导意义.本文主要对蛋白酶A外泌机制和蛋白酶A外泌对酒类酿造影响的相关研究进行综述.; 陈叶福卢君韩月然刘明明肖冬光; 关键词：蛋白酶A 酿酒酵母生理功能分泌途径酿酒

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国家自然科学基金(31271916)