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广州市科技计划项目(2001-Z-037-01)
广州市科技计划项目(2001-Z-037-01)
- 作品数：14 被引量：59H指数：6
- 相关作者：何冬梅张洹雷小勇李文瑜余卫更多>>
- 相关机构：暨南大学广东省人民医院南华大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- bcl-2反义寡核苷酸增强足叶乙苷诱导原代白血病细胞凋亡的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 :研究 bcl- 2的反义寡核苷酸对足叶乙苷 (VP1 6 )诱导原代培养的急性白血病(AL)细胞凋亡的影响。方法 :用细胞计数法观察细胞的生存情况 ;用免疫荧光标记法通过流式细胞仪观测细胞 bcl- 2蛋白水平 ;用形态学观察及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 :靶向 bcl- 2 m RNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与 VP1 6 联合作用 AL 细胞 4 8h,细胞的生存受到明显的抑制 ,分别同无关寡核苷酸 (NS- ODN)联合 VP1 6 组、单用 VP1 6 组进行比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与 VP1 6 联用 ,均能明显下调 AL 细胞 bcl- 2蛋白的表达 ,并且联合作用 AL 细胞 4 8h的凋亡细胞百分率分别与 NS- ODN联合 VP1 6 组、单用 VP1 6 组进行比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :针对 bcl- 2 m RNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强 VP1 6 诱导急性白血病细胞的凋亡。
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词：BCL-2反义寡核苷酸足叶乙苷白血病细胞凋亡
- Bcl-2反义寡核苷酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：12
- 2006年
- 背景与目的:研究表明,靶向bcl-2mRNA的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)在体内外可产生抗肿瘤效应。我们已经在bcl-2mRNA蛋白编码区发现了一个新的有效反义作用靶点,同时证实这个靶点的ASODN能增强白血病及肺癌细胞对化疗药物、放射线的敏感性。本研究进一步探讨bcl-2ASODN对裸鼠非小细胞肺癌NCI-H460细胞移植瘤的成瘤能力和移植瘤的抑制作用。方法:将经硫代修饰的bcl-2ASODN直接加入到培养的NCI-H460细胞内,MTT法检测细胞生长抑制率,然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时取未经处理的NCI-H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分为bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组。实验组用15mg/kgASODN两天一次直接瘤内注射,连用3周,测肿瘤大小和组织形态学改变。结果:bcl-2ASODN显著抑制NCI-H460细胞的生长,并呈时间依赖性,与无义寡核苷酸组相比,有显著性差异(P<0.05)。bcl-2ASODN作用后的NCI-H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低。平均成瘤时间延长为12.6天(P<0.01),最大抑瘤率达87.5%(P<0.01)。在处理NCI-H460细胞裸鼠移植瘤过程中,生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组的瘤体进行性增大,而bcl-2ASODN组的瘤块生长缓慢,ASODN处理组与两个对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。处理后第30天剥离瘤块,ASODN处理组分别与两个对照组瘤重相比均有显著性差异(P<0.01)。bcl-2ASODN处理组裸鼠NCI-H460细胞移植瘤的生长受到明显抑制,抑瘤率为71.0%。病理学检查可见,bcl-2ASODN处理组瘤块内有大片的变性坏死灶,结缔组织增生,炎性细胞浸润;而两个对照组瘤体内癌细胞呈弥漫性密集分布。结论:bcl-2ASODN能降低NCI-H460细胞的成瘤能力,抑制移植瘤生长。
- 何冬梅张洹
- 关键词：反义寡核苷酸裸鼠皮下移植瘤抑瘤作用
- 三氧化二砷诱导Raji细胞凋亡过程中端粒酶活性和hTERT、bcl-2基因表达的研究被引量：13
- 2005年
- 目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Raji细胞凋亡并初步探讨端粒酶活性、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及bcl-2基因表达之间的关系。方法:通过姬姆萨染色来观察细胞的凋亡;以RT-PCR分析bcl-2、hTERT基因的mRNA表达水平;利用半定量多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测As2O3处理Raji细胞前后端粒酶活性的改变。结果:2μmol/LAs2O3能诱导Raji细胞凋亡,2μmol/LAs2O3作用于Raji细胞8h、12h、24hhTERTmRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异(P<0.05),12h、24hbcl-2mRNA相对表达量分别与对照组比较有显著差异。2μmol/LAs2O3作用48h后,Raji细胞中端粒酶活性即出现下降,作用72h、96h,端粒酶的活性明显受到抑制,吸光度分别为0.829、0.328、0.291,分别与空白对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论:As2O3诱导Raji细胞凋亡过程中,端粒酶活性下调与hTERT、bcl-2基因mRNA表达下降有关。
- 何冬梅张洹刘革修余卫
- 关键词：三氧化二砷RAJI细胞HTERT基因BCL-2基因细胞凋亡
- hTERT基因反义核酸促进顺铂诱导原代急性淋巴细胞白血病细胞凋亡的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 :利用人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的反义寡核苷酸 (ASPS -ODN)抑制人原代急性淋巴细胞白血病 (ALL)细胞hTERT基因表达后 ,观察顺铂对ALL细胞凋亡的影响。方法 :采用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达量的变化 ;以台盼蓝拒染法计数细胞数 ,确定细胞的增殖情况 ;Hoechst 332 5 8和PI双染色法观察凋亡细胞的形态变化 ;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 :hTERT反义核酸作用于ALL细胞 72hhTERT蛋白表达阳性率为 (32 17± 3 0 0 ) % ,与空白对照组 (6 6 31± 2 84 ) %及正义核酸作用组 (6 2 5 6± 6 11) %比有显著差异 (P <0 0 5 ) ;而正义核酸作用组与空白对照组比无显著差异 (P >0 0 5 )。hTERT反义核酸作用于ALL细胞 2 4h加入顺铂 ,再共同作用 4 8h ,ALL活细胞均数为 1 75 0× 10 8cells/L ,与单用顺铂组 (2 0 90× 10 8cells/L)及hTERT正义核酸联用顺铂组 (1 990× 10 8cells/L)相比 ,对细胞抑制明显增强 (P <0 0 5 )。hTERTASPS -ODN作用于ALL细胞 2 4h再加入顺铂作用 4 8h ,细胞出现典型的凋亡形态学改变。hTERTASPS -ODN与 2 5 μmol/L顺铂联合作用于ALL细胞 4 8h的凋亡细胞百分率 (37 85± 2 4 4 ) %分别同SPS -ODN与顺铂联合作用组 (15 16±2
- 李文瑜张洹何冬梅
- 关键词：HTERT基因顺铂细胞凋亡
- Bcl-2反义核酸的设计及对K562细胞凋亡的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 :探讨bcl 2不同靶点的反义寡核苷酸 (ASODN)对白血病细胞株K5 6 2细胞凋亡的影响。方法 :用RNA二级结构预测程序预测bcl 2mRNA的二级结构 ;免疫荧光标记观察细胞bcl 2蛋白水平 ;细胞记数观察细胞的生存情况 ;用流式细胞仪观察细胞凋亡。结果 :在 5个初选的反义序列中 ,靶向bcl 2mRNA蛋白编码区和翻译起始区的ASODN能明显地下调bcl 2蛋白的表达 ,并且两个不同靶点的ASODN能有效地抑制K5 6 2细胞的生长活性、促进细胞凋亡 ;靶向bcl 2mRNA蛋白编码区的ASODN降低细胞bcl 2蛋白、促进细胞凋亡的作用较靶向翻译起始区的ASODN强。随机的无义寡核苷酸对K5 6 2细胞的生长活性、bcl 2蛋白水平及细胞凋亡率均无影响。结论 :分别在bcl 2mRNA翻译起始区和蛋白编码区发现了两个有效的反义作用靶点 ,针对这两个靶点的ASODN能特异性促进K5 6
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词：BCL-2反义寡核苷酸K562细胞细胞凋亡
- hTERT基因反义核酸对Raji细胞端粒酶活性的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 :观察人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的全硫代修饰反义寡核苷酸 (ASODN)对Raji细胞端粒酶活性的影响。方法 :端粒酶聚合酶链反应 -酶联免疫测定法检测Raji细胞的端粒酶活性 ;采用逆转录 -聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水平 ;以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。结果 :hTERTASODN作用于Raji细胞后 ,hTERTmRNA表达水平明显降低 ,ASODN与Raji细胞共同孵育 4 8h ,hTERT蛋白表达阳性率降为 5 0 15 %± 3 4 9% ,72hhTERT蛋白表达阳性率降为 33 35 %± 2 75 %。而hTERT正义核酸作用 2 4、4 8、72h对hTERT蛋白表达阳性率 (6 5 % )无显著影响 (P >0 0 5 )。hTERT基因ASODN作用于Raji细胞 4 8h ,其端粒酶活性明显降低 ,作用 72h ,端粒酶活性明显受到抑制 ,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 :hTERT基因反义寡核苷酸特异性地抑制Raji细胞的端粒酶活性。
- 李文瑜张洹何冬梅
- 关键词：基因端粒酶逆转录酶寡核苷酸类反义RAJI细胞端粒酶
- 端粒酶基因反义核酸下调HL-60细胞端粒酶活性的研究被引量：8
- 2002年
- 背景与目的:人类端粒酶催化亚单位(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因是端粒酶活化唯一的限制性组分。在细胞永生化过程中,hTERT表达的调控是一个关键性的靶目标。端粒酶RNA的反义核酸可以抑制端粒酶的活性及肿瘤细胞的生长。本研究观察hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响。方法:采用端粒重复序列扩增法检测白血病细胞的端粒酶活性;采用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。结果:hTERT基因ASODN作用于HL-60细胞后,hTERTmRNA表达水平及蛋白表达水平均明显降低,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比有显著性差异(P<0.05)。同时hTERT基因ASODN作用于HL-60细胞48h,其端粒酶活性明显降低;作用72h,端粒酶活性明显受到抑制。结论:通过hTERT基因反义寡核苷酸特异性地抑制hTERT基因的表达可下调HL-60细胞的端粒酶活性。
- 何冬梅张洹
- 关键词：端粒酶HL-60细胞HTERT
- hTERT基因反义核酸对化疗药物诱导CEM细胞凋亡的影响
- 2005年
- 目的:利用人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义寡核苷酸(ASODN)抑制人T淋巴细胞白血病细胞株(CEM)端粒酶活性后,探讨化疗药物(顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙)对CEM细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝拒染法观察hTERTASODN与化疗药物(顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙)联合作用对CEM细胞系生长的影响;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果:hTERTASODN作用于CEM细胞24h再加入柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙,对细胞生长的抑制分别与单用柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙及hTERT正义寡核苷酸(SODN)联合柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙组相比,统计学上无显著差异(P>0.05)。hTERT反义核酸作用于CEM细胞24h加入顺铂,再共同作用48h,CEM活细胞均数为2.318×108cells/L,与单用顺铂组(3.250×108cells/L)及hTERT正义核酸联用顺铂组(3.175×108cells/L)相比,对细胞抑制明显增强(P<0.05)。hTERTASODN作用于CEM细胞24h再加入顺铂作用48h,细胞出现典型的凋亡形态学改变。hTERTASODN与2.5μmol/L顺铂联合作用于CEM细胞48h的凋亡细胞百分率(19.47%)分别同SODN与顺铂联合作用组(6.97%)、单用顺铂作用组(6.02%)进行比较有显著差异(P<0.01)。结论:hTERT基因反义寡核苷酸能促进顺铂诱导CEM细胞凋亡。
- 李文瑜张洹何冬梅
- 关键词：CEM细胞细胞凋亡
- Bcl-2反义寡核苷酸增强阿糖胞苷诱导原代白血病细胞凋亡的研究被引量：11
- 2002年
- 背景与目的:有研究证实,针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区的2个有效反义作用靶点的反义寡核苷酸能增强HL-60和K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素、足叶乙甙的敏感性。本研究观察这两个新靶点的反义寡核苷酸对Ara-C诱导原代培养的急性白血病(AL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞凋亡的影响。方法:用细胞记数法观察细胞的生存情况;免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色法观察并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:靶向bcl-2mRNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与Ara-C联合作用AL、CLL细胞48h,细胞的活性受到明显的抑制,分别同无关寡核苷酸(NS-ODN)联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与Ara-C联用均能明显下调AL、CLL细胞Bcl-2蛋白的表达,并且联合作用AL、CLL细胞48h的凋亡细胞百分率分别与NS-ODN联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。与靶向bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸比较,靶向蛋白编码区的反义寡核苷酸提高AL细胞对Ara-C的敏感性作用要强些(P<0.05)。结论:针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强Ara-C诱导AL、CLL细胞的凋亡。
- 雷小勇张洹何冬梅
- 关键词：反义寡核苷酸阿糖胞苷白血病细胞
- PCR-ELISA和PCR-PAGE法检测血液肿瘤细胞株的端粒酶活性被引量：1
- 2003年
- 目的:通过端粒酶聚合酶链反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)和聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)方法检测血液肿瘤细胞株HL-60、K562、Raji的端粒酶活性,探讨其临床应用价值。方法:PCR-ELISA方法是将端粒重复序列PCR变性产物与地高辛标记且对端粒重复片段特异的探针杂交,杂交产物通过ELISA进行测定。PCR-PAGE法是将端粒重复序列PCR产物直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过硝酸银染色测定端粒酶活性。结果:在端粒酶PCR-ELISA方法检测中,PCR在25～35次循环之间,吸光度A值与循环次数呈线性关系,35～45次循环已达到平台期。PCR-ELISA法检测显示HL-60、K562、Raji细胞均表达高水平的端粒酶活性,吸光度A均值分别为2 362、2 336、2 145。对HL-60、K562、Raji细胞的端粒重复序列扩增的PCR产物直接进行PAGE电泳、银染均呈现3条以上间隔6bp的特征性阶梯状条带。结论:对端粒重复序列PCR产物可同时进行ELISA检测和PAGE-银染,两种方法均可用于恶性肿瘤的临床诊断,ELISA法更为灵敏而简单,且可相对定量。
- 何冬梅张洹
- 关键词：端粒酶酶联免疫测定聚丙烯酰胺凝胶电泳
