国家自然科学基金(38970047)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：赵连三刘聪雷秉钧王锦蓉秦山更多>>
- 相关机构：华西医科大学附属第一医院四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金美国中华医学基金会项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢性乙型肝炎患者精子中乙型肝炎病毒DNA定位被引量：3
- 2000年
- 张智翔赵连三王锦蓉雷秉钧刘聪
- 关键词：慢性乙型肝炎精子HBV-DNA原位杂交
- 四环素基因表达调控系统介导的HBVX基因体外表达细胞株的建立
- 2002年
- 目的 建立稳定、高效的HBxAg体外表达细胞株 ,以便进一步研究HBVX基因和HBxAg的致癌作用及机理。方法 构建带有完整四环素基因关闭 (Tet off)系统的HBVX基因重组表达质粒pBPSTR1 FlagX ,用该重组质粒转染NIH 3T3细胞 ,筛选嘌呤霉素抗性细胞克隆 ,用抗 FlagM2 单抗和兔抗 HBx作蛋白质免疫印迹分析 ,检测细胞内Flag HBxAg表达和四环素调控其表达的情况。结果 重组质粒pBPSTR1 FlagX转染NIH 3T3细胞后获得 30个生长良好的嘌呤霉素抗性细胞克隆。其中 12个细胞克隆有Flag HBxAg的稳定表达 ,且有 5个克隆的Flag HBxAg表达受四环素调控。当四环素浓度逐渐增高时 ,细胞内Flag HBxAg的表达逐渐减弱。四环素浓度达 1μg ml时 ,Flag HBxAg表达被完全抑制。结论 本研究成功构建了四环素调控系统介导的HBVX基因体外表达细胞株 ,该细胞株不仅能稳定高水平地表达HBxAg ,而且具有定时“开”“关”和定量调节HBxAg表达水平的特性 。
- 唐红林勇秦山赵连三
- 关键词：X基因细胞株基因表达调控四环素重组质粒
