国家自然科学基金(81160239)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
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- 荧光素酶基因稳定表达的间充质干细胞系的构建被引量：3
- 2014年
- 目的 通过表达荧光素酶的慢病毒载体感染间充质干细胞株,建立稳定表达荧光素酶的间充质干细胞系. 方法 2013年5月至2014年1月,根据gene bank查询荧光素酶基因设计引物,PCR扩增获得目的基因,体外构建质粒,构建表达荧光素酶的慢病毒载体,并感染间充质干细胞株C3H10T1/2.Puromycin浓度为2mg/ml加压筛选,鉴定.Western blotting检测荧光素酶的表达,免疫荧光观察荧光素酶在小鼠间充质细胞C3H10T1/2中的表达. 结果 Western blotting检测,结果显示此细胞表达的蛋白大小约60×10^3,表明感染病毒的C3H10T1/2细胞表达荧光素酶蛋白.免疫荧光检测,与未感染病毒的正常对照组相比,感染病毒的细胞组约100％细胞红色荧光呈阳性,表明已经构建好稳定表达荧光素酶的C3H10T1/2细胞. 结论 通过表达荧光素酶的慢病毒转染间充质干细胞,可获得荧光素酶稳定表达的间充质干细胞.转染效果确切,荧光素酶基因表达稳定.
- 董苑李彩霞赵娴刘流
- 关键词：间充质干细胞荧光素酶慢病毒转染
- BMP2的表达对联合培养体系中骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响被引量：7
- 2013年
- 目的研究BMP2在hBMSCs和hUVECs体外联合培养系统中对细胞增殖和成骨分化的调控作用。方法选用第三代hUVECs、hBMSCs细胞以及经BMP2特异性静默干扰处理的hUVECs细胞建立联合培养体系。观察不同培养组单独hBMSCs组、hUVECs与hBMSCs细胞联合培养组以及经BMP2蛋白静默干扰处理hUVECs与hBMSCs细胞联合培养干扰组中BMSCs数量，运用酶活性法和放射免疫法分别对碱性磷酸酶及骨钙素的表达进行检测。结果在BMP2静默的hUVECs联合hBMSCs培养干扰组观察到随BMP2蛋白分泌减少，hBMSCs的细胞数目下降，但仍高于单独hBMSCs培养组，差异有统计学意义（P〈0．05）。联合培养体系中运用RNA干扰技术静默血管内皮细胞对BMP2的表达后，联合培养干扰组内hBMSCs对碱性磷酸酶、骨钙素在同一时间点表达低于联合培养组，但仍然高于单独问充质干细胞培养组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论联合培养体系中血管内皮细胞分泌的BMP2在BMSCs增殖和成骨分化诱导方面起着重要作用。
- 董苑杨瑞年王福科刘流
- 关键词：骨髓间充质干细胞血管内皮细胞骨形态发生蛋白2
