贵州省优秀科技教育人才省长资金项目(200822)
- 作品数：8 被引量：33H指数：3
- 相关作者：许厚强陈祥骆衡刘金河孟惠惠更多>>
- 相关机构：贵州大学贵州山地农业病虫害重点实验室更多>>
- 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 溴化乙锭对布鲁姆综合症解旋酶生物学特性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究溴化乙锭(EB)对BLM解旋酶的生物学特性的影响。方法应用荧光偏振技术研究EB对BLM解旋酶的DNA结合活性与解链活性的影响;应用自由磷检测技术研究EB对BLM解旋酶的ATPase活性的影响;应用紫外吸收光谱法研究EB对BLM解旋酶的构象的影响。结果EB可完全抑制BLM解旋酶的DNA结合活性,当双链DNA与单链DNA作为底物时,Ci值分别为(21.3±0.7)μmol.L-1和(3.3±0.3)μmol.L-1;可完全抑制BLM解旋酶的解链活性,Ci值为(9.0±0.3)μmol.L-1;对BLM解旋酶的ATPase活性有抑制作用,但差异无显著性;可改变BLM解旋酶的构象,最大吸收峰发生红移。结论 EB可以结合BLM解旋酶并改变其构象,抑制其与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生物学活性。
- 许庆贺许厚强骆衡陈祥张金彪李坤
- 关键词：溴化乙锭DNA结合活性ATPASE活性
- 苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响及作用机制。方法运用荧光偏振技术和ATPase检测技术分析苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶活性、DNA结合活性和ATPase活性的影响。结果苯甲酸雌二醇对RecQ解旋酶活性、DNA结合活性及ATPase活性均有弱抑制作用,对RecQ解旋酶活性抑制常数Ki为5×10-3 nmol.L-1,对dsDNA和ssDNA结合活性的Ki分别为5×10-2和0.5 nmol.L-1。结论在体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性具有弱抑制作用,二者至少有两个作用位点。
- 段丽霞许厚强陈祥骆衡
- 关键词：苯甲酸雌二醇DNA结合活性ATPASE活性
- 三种癌细胞株中Bloom综合征解旋酶(BLM)的表达水平高于正常细胞被引量：20
- 2014年
- 由于Bloom综合征解旋酶（Bloom’s syndrome helicase，BLM）基因缺陷引起的Bloom综合征（Bloom’s syndrome，BS）是一种罕见的常染色体隐性遗传病，BS患者的临床特征表现为严重的生长迟缓、学习障碍、免疫缺陷等。BLM解旋酶在睾丸和胸腺中高表达，另一方面，BLM基因的突变和高表达与肿瘤发生相关，如结肠癌、肺癌、白血病等。本研究观察了A549人肺癌细胞、SGC7901人胃癌细胞、PC3人前列腺癌细胞与HL-7702[L-02]人正常肝细胞中，BLM解旋酶在mRNA水平及蛋白水平表达量的差异，为寻找新的特异分子治疗靶点提供依据。
- 孟惠惠许厚强刘金河王时雄
- 关键词：表达量
- 丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响被引量：7
- 2011年
- 目的研究体外丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶结构和功能的影响及二者的相互作用机制。方法分别运用荧光偏振技术、ATPase试剂盒和紫外吸收光谱技术分析丙酸睾酮对大肠杆菌RecQ解旋酶活性和DNA结合活性、AT-Pase活性和构象的影响。结果丙酸睾酮能够影响E.coliRecQ解旋酶的活性。低浓度促进解旋酶活性,高浓度抑制;抑制RecQ解旋酶与dsDNA的结合活性,其抑制常数Ki小于7×10-5 nmol.L-1;对与ssDNA结合活性的Ki为7×10-3 nmol.L-1;对ATPase活性抑制作用的时间相关性较弱;影响RecQ解旋酶的构象变化,但峰位无偏离。结论提示丙酸睾酮与RecQ解旋酶具有弱相互作用,二者具有两个结合位点。
- 段丽霞许厚强陈祥骆衡
- 关键词：丙酸睾酮大肠杆菌DNA结合活性ATPASE活性构象
- 甘草次酸对Bloom解旋酶生物学特性的影响被引量：11
- 2014年
- 甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)是甘草主要活性组分,可诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞生长.然而,其对BLM解旋酶的抑制作用尚未见报道.本文注视甘草次酸对BLM解旋酶构象、二级结构和生化活性的影响.圆二色光谱和紫外光谱分析显示,GA可破坏BLM642-1290解旋酶α-螺旋结构,改变其构象,并具有2个结合位点.采用荧光偏振技术和自由磷检测证明,GA以浓度依赖的方式抑制BLM642-1290解旋酶与底物dsDNA及ssDNA的结合,抑制BLM642-1290解旋酶活性及ATP酶活性,且抑制类型为混合抑制.综上所述,本文证明GA可通过结合BLM解旋酶,改变BLM解旋酶构象,抑制BLM解旋酶与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生化活性.我们的发现将对深入认识GA的抗肿瘤作用有新的启示.
- 刘金河许厚强孟惠惠罗霂榃
- 关键词：甘草次酸生化活性圆二色谱荧光偏振
- Bloom解旋酶突变体的克隆与表达
- 2013年
- blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术,通过两轮重组PCR,构建985位和1 036位氨基酸突变的BLM解旋酶多点突变基因,克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。分离纯化获得了高纯度(>95%)的双突变型BLM解旋酶,并对其进行了Western blotting鉴定。这些结果可为进一步研究BS的致病机制奠定基础。
- 张金彪许厚强骆衡许庆贺陈祥李坤
- 关键词：重组PCR基因克隆表达
- BLM(642-1290)重组解旋酶的优化表达被引量：1
- 2011年
- Bloom综合症(Bloom s syndrome)是人类一种少见的常染色体隐性遗传疾病,BLM基因突变导致这种疾病的发生,患者染色体极不稳定,是多种癌症的易患体,其致病机理不清楚.该研究在优化诱导表达温度、时间、IPTG质量浓度、pH值、培养基种类以及培养基成分的基础上,建立了BLM642-1290重组蛋白表达、分离和纯化方法.最优表达条件为IPTG0.45 mmol/L,诱导温度18℃,诱导表达时间20 h,pH值7.0.在LB培养基中添加终质量浓度为5 mmol/L的EDTA能够增加蛋白的表达量.该实验所建立的方法为进一步开展Bloom综合症的研究奠定了基础.
- 陈祥骆衡段丽霞张勇张勇
- 光谱法研究BLM解旋酶的稳定性
- 2011年
- BLM解旋酶是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,在维持染色体的稳定性中具有重要的作用,其突变会导致Bloom综合症。Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者易患各种类型癌症。本研究利用紫外吸收光谱法研究了pH、反应时间、NaCl浓度对BLM解旋酶的稳定性和ATP酶活性的影响。结果显示,pH会影响BLM解旋酶的构象和ATP酶活性,碱性环境对其构象和ATP酶活性影响比酸性环境大。酶在稀释的过程中对其构象和ATP酶活性有影响。NaCl浓度小于500mmol/L时,对酶构象和ATP酶活性影响不大;当NaCl浓度大于500mmol/L时,酶的构象和ATP酶活性均受到影响。这些研究结果将为开展小分子药物与BLM解旋酶的相互作用研究提供相关资料。
- 陈祥骆衡许厚强
- 关键词：紫外吸收光谱法稳定性
