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口蹄疫病毒O型Mya98谱系猪源毒株和牛源毒株全基因组的比较被引量：2: 2014年; 为了查明我国新流行的口蹄疫病毒(FMDV)O型Mya98谱系猪源和牛源毒株的序列差异,采用RT-PCR方法,对FMDV O型Mya98谱系牛源毒株(O/BY/CHA/2010)和猪源毒株(O/GZ/CHA/2010)的基因组全序列进行了扩增和测序,并与O型其他牛源和猪源参考毒株的基因组进行了比较分析。结果显示,O/BY/CHA/2010毒株和O/GZ/CHA/2010毒株都属于SEA拓扑型的Mya98谱系毒株。O/BY/CHA/2010毒株和O/GZ/CHA/2010毒株与来自Mya98谱系的其他毒株的全基因的核苷酸同源性大于98.0%。除了VP4、2A和3BCD区,O/BY/CHA/2010毒株和O/GZ/CHA/2010毒株与Mya98谱系的其他毒株的其他基因区的同源性较低。与非SEA拓扑型毒株(UKG/7B/2007、Akesu/58和PanAsia谱系毒株)相比,在2A、P2和3CD区,具有较高的同源性,表明O/BY/CHA/2010和O/GZ/CHA/2010可能具有这些毒株的生长特性。进一步的序列分析表明,O/GZ/CHA/2010毒株在L蛋白第10位增加了1个亮氨酸,在S片段缺失70个核苷酸。试验结果为进一步分析氨基酸插入和核苷酸缺失对毒株致病性的影响奠定了基础。; 吕律杨帆何继军靳野郭建宏郑海学刘湘涛; 关键词：口蹄疫病毒全基因组 S片段

稳定表达鼠源整联蛋白αvβ6的CHO-677细胞系的构建: 2015年; 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物。乳鼠常作为一种重要的实验动物模型用于FMDV的研究;整联蛋白αvβ6是FMDV的重要受体之一。为深入研究整联蛋白αvβ6在FMDV感染乳鼠中所发挥的作用,克隆了乳鼠整联蛋白αvβ6的两个亚基,并将其导入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO-677)基因组中,构建了稳定表达乳鼠整联蛋白αv和β6亚基的细胞系CHO-677-mαvβ6,并分别选用两种不同血清型的野生型FMDV毒株Asia1/HN/CHA/06和O/BY/CHA/2010感染细胞系来分析细胞系对FMDV的易感性。首先通过PCR和间接免疫荧光试验证明了细胞系中整联蛋白αvβ6在基因水平成功导入,在蛋白水平成功表达。然后,通过实时荧光定量RT-PCR检测病毒RNA拷贝数,并结合TCID50试验测定了代表毒株在两个细胞上的生长曲线。结果表明,与亲本细胞CHO-677相比,细胞系CHO-677-mαvβ6对FMDV更易感,从αvβ6的功能性上进一步验证了细胞系被成功构建。; 朱志坚连凯琪杨帆张伟郑海学杨孝朴; 关键词：FMDV 细胞系

Asia 1型口蹄疫病毒抗原表位突变株的构建及其生物学特性分析: 2015年; 为了研制口蹄疫抗原表位突变标记疫苗,本研究以含有Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)c DNA全长的感染性克隆p Asia 1-FMDV作为骨架,将3D蛋白中第27位氨基酸的H和31位的氨基酸N分别突变成Y和R,从而突变3D蛋白的一个抗原表位,将构建的带有突变表位的重组质粒转染BHK-21细胞,成功拯救出一株突变FMDV。经比较后发现,重组病毒的生物学特性与亲本毒株相似。病毒中和试验结果显示,抗重组病毒的血清与亲本病毒有良好的反应性。Western blotting结果表明重组病毒诱导的抗体能与突变的表位合成肽反应而不与野生型病毒的表位合成肽发生反应,从而区分重组病毒与亲本病毒。综上所述,这株抗原表位突变FMDV有望作为口蹄疫标记疫苗候株进一步评估。; 张岩胡永浩杨帆杨波王松豪朱紫祥郑海学; 关键词：口蹄疫病毒

口蹄疫病毒A型SAP突变毒株的构建及其生物学特性的测定: 2014年; 为了获得对牛和猪低致病性或无致病性的口蹄疫(FMD)疫苗毒株,提高疫苗毒株的生物安全性,选择口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白酶编码基因SAP区域进行突变。利用反向遗传操作技术,构建FMDV SAP区域突变的A型病毒重组质粒prA-SAP-FMDV。利用脂质体将构建的重组质粒转染BHK21细胞,重组质粒能够致细胞病变(CPE)。连续传代后,经RT-PCR鉴定和间接免疫荧光试验等,SAP突变的重组病毒rA-SAP-FMDV被成功拯救。另外,比较测定了该重组毒与亲本毒rA-WT-FMDV对BHK21细胞和乳鼠的致病性;结果显示,rA-SAP-FMDV的TCID50/mL为10-7.17,LD50为10-6.5/0.2mL,与亲本毒株的生物学特性相似。这一突变SAP域的A型FMDV的获得为研发生物安全性高的A型FMD疫苗奠定了基础。; 杨洋杨帆杨波郑海学; 关键词：A型口蹄疫病毒反向遗传操作病毒拯救

口蹄疫病毒VP1蛋白诱导犊牛甲状腺初代细胞凋亡的鉴定: 2014年; 为了制备和培养犊牛甲状腺初代细胞(CTY),并检测口蹄疫病毒VP1蛋白对其诱导的凋亡情况,采用原代细胞培养方法,取初生犊牛甲状腺制备初代细胞并培养。采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒VP1基因,再用限制性内切酶EcoRⅠ+XhoⅠ酶切后定向克隆到表达载体pCAGGS中,构建重组质粒pCAGGS-VP1,转染CTY,用Western-blot检测口蹄疫病毒VP1蛋白在犊牛甲状腺初代细胞中的表达情况;通过显微镜观察转染的CTY细胞状态、经AV-PI双染色、检测线粒体膜电位变化和Hoechst-33258荧光染色来检测细胞凋亡。结果显示,成功制备了犊牛甲状腺初代细胞,构建的重组质粒可以在犊牛甲状腺初代细胞中表达,通过几种方法均证明口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导犊牛甲状腺初代细胞的凋亡,细胞凋亡率比空载体对照组高约2倍。结果表明,口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导CTY的凋亡,这一结果为深入研究口蹄疫病毒VP1蛋白凋亡功能域和VP1诱导的凋亡途径奠定了基础。; 李营营毛箬青杨帆曹伟军郑海学张淼涛; 关键词：VP1蛋白细胞凋亡

干扰素诱导蛋白鸟苷酸结合蛋白1研究进展被引量：4: 2014年; 鸟苷酸结合蛋白1(Guanylate-binding protein 1,GBP1)为一种干扰素诱导蛋白,其属于鸟苷酸结合蛋白家族的一员。GBP1在抗病原微生物与抗肿瘤等多种生物学反应中发挥着重要作用。随着对GBP1的深入研究,发现IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL1α、IL1β、TNF-α和LPS均能够诱导GBP1的表达;因此,GBP1发挥的生物学效应也越来越广泛,并逐步地被挖掘和展现出来。尤其是GBP1发挥的抗病原微生物与抗肿瘤功能受到了极为广泛的关注。本论文综述了GBP1的分子结构、生物学活性、抗病原微生物特性以及已发现的一些其他功能的研究进展,为GBP1的后续研究提供参考和依据。; 朱紫祥曹阳春曹伟军杨帆马志永郑海学; 关键词：抗病毒抗肿瘤

口蹄疫病毒入侵宿主细胞研究进展被引量：3: 2015年; 口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科,口蹄疫病毒属的典型成员,是一种基因组大约含有8 400个核苷酸的无囊膜单股正链RNA病毒。大量研究发现识别细胞表面受体并侵入细胞是FMDV感染宿主细胞非常重要的环节;对FMDV而言,利用哪种受体就决定了利用哪种內吞路径。近年来在口蹄疫病毒入侵宿主细胞方面进行了大量研究,在一定程度上解释了口蹄疫病毒感染机制方面的问题,为解决实际生产问题提供了重要依据。对前期工作进行阶段性总结,为后期深入研究口蹄疫病毒致病机制和探索更有效的防治措施提供参考。; 朱志坚连凯琪郑海学杨孝朴; 关键词：口蹄疫病毒入侵机制自噬

RNA病毒阻断RIG-I样受体识别dsRNA机制研究进展被引量：6: 2014年; RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)是一类重要的模式识别受体,其在机体抵抗病毒感染过程中发挥着至关重要的作用。RLRs通过级联放大效应,诱导I型干扰素的表达,激活干扰素通路,最终发挥抗病毒效应。而病毒为了自身长期的生存和繁殖,在长期的进化和演化过程中,不断的与机体免疫系统进行着抗衡和斗争,由此演化出了一系列的拮抗策略。RLRs主要识别5′端带有三磷酸基团的RNA(包括单链和双链RNA)和双链RNA,其在启动免疫应答过程中可以通过与病毒RNA结合而得以激活,然后招募下游分子,激活整个通路的信号转导。病毒为了阻断RLRs对病毒RNA的识别,拮抗RLRs通路的激活,进化出了非常精细的对抗策略,主要分为:躲避、伪装和攻击三种策略。了解清楚病毒拮抗RLRs抗病毒的分子机制对于研制新的抗病毒药物及发展新的抗病毒策略具有深远意义。本文主要对RNA病毒阻断RLRs识别dsRNA机制的研究进展进行综述。希望为研究不同RNA病毒拮抗RLRs分子机制提供一定的参考和依据。; 王国庆朱紫祥曹伟军刘磊郑海学; 关键词：DSRNA RNA病毒拮抗作用

猪ESD真核表达质粒的构建及其抑制口蹄疫病毒复制的研究: 2016年; [目的]探究猪ESD蛋白的抗病毒功能,通过构建猪ESD真核表达质粒,研究其是否能够抑制口蹄疫病毒在PK-15细胞中的复制。[方法]从PK-15细胞中提取总RNA,反转录为c DNA,PCR扩增出猪的ESD基因,构建到pc DNATM3.1/Myc-His A真核表达载体上。通过Western blotting和实时定量PCR检测ESD蛋白的表达情况及其抗病毒功能。[结果]获得了猪ESD真核表达载体,转染后能够正常表达。FMDV感染PK-15细胞后,ESD转录水平显著上调;过表达ESD蛋白显著抑制FMDV的复制;下调表达ESD蛋白显著促进FMDV的复制。[结论]猪ESD蛋白能够抑制FMDV在PK-15细胞中的复制。; 李伟伟朱紫祥曹伟军杨帆李丹张克山刘湘涛郑海学; 关键词：口蹄疫病毒

口蹄疫病毒遗传进化研究进展被引量：1: 2016年; 口蹄疫病毒以"准种"状态生存和演变,具有群体庞大、复制突变率高、繁殖周期短等特征,是研究物种进化的最好模型之一。利用突变、遗传漂移、重组和基因迁移等多种机制以及在环境压力的作用下,口蹄疫病毒不断发生适应性进化,种群衍变分化导致其宿主嗜性、毒力、抗原性等表型出现差异,形成了具有明显区域特征的变异株系,展现出丰富的遗传多样性。现对口蹄疫病毒进化的源动力、进化方式及其结果进行综述,并对进化所产生的生物学效应进行介绍。; 郑海学刘湘涛; 关键词：口蹄疫病毒准种进化

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国家自然科学基金(31302118)

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