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福建省科技厅青年人才基金(2008F3046)
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酵母双杂交筛选与单剪接型2.2kb乙型肝炎病毒剪接特异性新蛋白相互作用的肝细胞蛋白
2010年
目的筛选与单剪接型2.2kb乙型肝炎病毒(HBV)剪接特异性新蛋白相互作用的肝细胞蛋白。方法PCR扩增单剪接型2.2kbHBV剪接特异性新基因TPss并克隆于诱饵载体pGBKT7,在证实TPss蛋白不具有自激活作用的前提下,以酵母双杂交系统筛查与TPss蛋白相互作用的肝细胞蛋白,进而通过哺乳动物细胞双杂交实验验证候选肝细胞蛋白与TPss蛋白在Huh7和HepG2肝细胞中的相互作用。结果构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-TPss,Westernblot显示其在酵母中表达TPss蛋白。酵母双杂交筛选及哺乳动物细胞双杂交证实TPss蛋白可与4种肝细胞蛋白相互作用,即组织蛋白酶B、微粒体环氧化物水解酶、组织蛋白酶D与纤维蛋白原γ链。结论TPss可与多种肝细胞蛋白相互作用。
陈婉南
陈金烟
黄清玲
林建银
林旭
关键词:
乙型肝炎病毒
RNA剪接
酵母双杂交
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