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腺病毒介导HSP70-HBsAg嵌合基因转染树突状细胞及生物学特性分析被引量：1: 2009年; 目的分析携带热休克蛋白70（HSP70）和乙肝表面抗原（HBsAg）嵌合基因的腺病毒表达载体感染人外周血诱导培养树突状细胞（DC）后其生物学特性的改变。方法从正常人外周血中分离单个核细胞，经Ad－HSPT0－HBsAg感染刺激后，在含细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）、白介素-4（IL4）、肿瘤坏死因子（TNF—α）的培养液体中体外诱导培养DC；采用荧光倒置显微镜、RT-PCR、流式细胞仪（FACS）和混合淋巴细胞反应（MLR）试验对人外周血来源的DC进行生物学特性分析。结果Ad—HSP70－HBsAg感染后的DC能够有效表达示踪蛋白GFP和转录基因HSP70－HBsAg，病毒感染组和对照组的DC在细胞形态、DC细胞表面分子表达和刺激同种异体的人外周血幼稚型T细胞增殖能力的方面无明显差别。结论Ad—HSP70－HBsAg可有效转染DC，感染后的病毒对Dc的生长和生物学特性无显著影响。; 雷春亮欧阳玲杨湛唐小平; 关键词：热休克蛋白质70 肝炎病毒乙型树突细胞

HBV S基因修饰树突状细胞疫苗诱导特异性CTL反应的探讨被引量：2: 2007年; 目的分析腺病毒载体介导HBVS基因修饰树突状细胞（DCs）能否诱导抗HBV特异性CTL反应。方法制备携带HBVS基因的重组腺病毒，分别转染外周血诱导培养的DCs，观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达；混合淋巴细胞反应测定HBV抗原基因修饰DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力；乳酸脱氢酶释放法检测特异性CTL细胞对HepG2 22．1．5靶细胞的杀伤能力。结果腺病毒载体能够高效介导HBVS基因在DCs中表达，且DC细胞形态完整；HBVS基因修饰DCs具有刺激同种异体T细胞增殖能力，同时能诱导抗HBV特异性CTL反应。结论HBVS基因修饰DCs疫苗具有增强抗HBV特异性CTL效应的能力，可能发展为一种新型抗病毒疫苗。; 雷春亮黄呈辉杨湛唐小平; 关键词：树突细胞腺病毒科

携带HSP70-HBsAg嵌合基因复制缺陷型重组腺病毒的制备被引量：2: 2008年; 目的构建表达乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和热休克蛋白70（HSP70）嵌合基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。方法扩增结核分枝杆菌HSP70基因片段，亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV-HBsAg上，与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共同电转化到大肠埃希菌BJ5183内进行同源重组，经卡那霉素抗性筛选和酶切鉴定筛选出携带HBsAg-HSP70嵌合基因的重组腺病毒载体，用脂质体包裹PacI酶切线性化的重组质粒，转染到293细胞内进行重组腺病毒的包装。体外转染真核细胞．通过示踪基因绿色荧光蛋白表达的观察、RT-PCR和ELISA检测目的基因的表达。结果成功获得重组腺病毒质粒pAd-HBsAg-HSP70。重组质粒pAd-HBsAg-HSP70导入293细胞，经包装和二次扩大培养获得了具有感染能力的重组腺病毒颗粒Ad-HBsAg-HSP70，其病毒滴度达2×10^12pfu／L，并能在真核细胞中有效表达目的基因。结论成功构建表达HBsAg-HSP70复制缺陷型重组腺病毒载体，为进一步开展HBV基因治疗研究提供实验基础。; 雷春亮黄呈辉杨湛唐小平; 关键词：腺病毒科乙型肝炎核心抗原乙型基因热休克蛋白70

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广东省自然科学基金(04003685)