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袁仕善
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- 所属机构:湖南师范大学医学院
- 所在地区:湖南省 长沙市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:World Health Organization
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- 目的:表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答。方法:从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化...
- 袁仕善吴少庭张仁利高世同黄达娜余新炳
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- 目的 构建SARS冠状病毒S蛋白部分序列 1(S1)的原核重组表达质粒 ,并分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法 采用逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)技术从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码S1蛋白的基因片段 ,并克隆至pMD18-T载体上 ;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序列分析 ;将阳性克隆的插入片段亚克隆至表达载体pGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析截短型S蛋白的表达。结果 RTPCR扩增出S1蛋白的特异片段 ,其阳性克隆的序列存在 2处碱基突变第 36位G变为A ;第 333位由C变为T) ,其中第 36位为有义突变 ,第 333位为同义突变 ;阳性克隆中截短型S1蛋白的基因片段被亚克隆到表达载体pGEX - 4T - 2而构建成重组表达质粒 ,并在JM 10 9中表达了S1蛋白的融合蛋白 ,表达的蛋白能与GST免疫血清和SARS病人血清反应。结论 成功构建了SARS冠状病毒S1蛋白的重组表达质粒 ,该质粒在大肠杆菌中表达了截短型S蛋白的融合蛋白。
- 袁仕善吴少庭秦莉黄达娜高世同张仁利余新炳
- 关键词：SARS冠状病毒基因序列严重急性呼吸综合征S1蛋白
- SARS冠状病毒S蛋白部分序列2的克隆与表达被引量：4
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- 目的 构建SARS冠状病毒棘突蛋白部分序列 2 (S2 )的原核表达质粒 ,分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法 采用逆转录聚合酶链式反应技术从SARS冠状病毒基因组中扩增出编码S蛋白的第 2 170到 2 814位碱基的基因片段 ,克隆至 pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序。用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定转化菌落。将阳性菌落经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达。结果 RT -PCR扩增出S2特异片段 ,经测序与GenBank比对存在 1处碱基突变。S2基因片段亚克隆至表达载体 pGEX - 4T - 2构建成重组表达质粒 ,并在JM 10 9中表达了S2融合蛋白。结论 成功构建了SARS冠状病毒S2的重组表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达了S2融合蛋白。
- 秦莉吴少庭王西明袁仕善雷明军潘辉榕黄达娜高世同张仁利屈伸
- 关键词：SARS严重急性呼吸综合征冠状病毒S2蛋白基因克隆
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- 袁仕善吴少庭秦莉黄达娜张仁利高世同余新炳
- 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒属蛋白质S纯化
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- 2002年
- 目的 分析日本血吸虫成虫呕吐物与感染血清的免疫反应性 ,寻找特异性的血吸虫病诊断抗原。方法 采用 SDS- PAGE和免疫印迹分析呕吐物的免疫反应性 ,过碘酸钠氧化处理以鉴定呕吐物的抗原决定簇的性质。结果 日本血吸虫成虫呕吐物中存在能被血吸虫感染血清识别的特异抗原 31/ 32、4 7、6 0 / 6 2 k Da蛋白及 6 7k Da蛋白 ;31/ 32 k Da蛋白和 6 7k Da蛋白的抗原表位为蛋白 ,而 4 7k Da蛋白和 6 0 / 6 2 k Da蛋白的抗原表位为糖基。结论 日本血吸虫成虫呕吐物中存在血吸虫感染血清识别的特异抗原 ,其中 31/ 32 k Da蛋白已报告可用于血吸虫病诊断 ,4 7k Da蛋白和 6 0 / 6 2k Da蛋白含糖基表位并具有潜在的诊断价值。
- 袁仕善易新元曾宪芳黄跃龙Larry McReynolds
- 关键词：日本血吸虫成虫呕吐物免疫印迹
- 日本血吸虫铁蛋白基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究被引量：6
- 2004年
- 目的 :构建、表达、纯化日本血吸虫铁蛋白基因的原核表达重组蛋白 ,并初步观察其免疫诊断价值。方法 :将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆于pGMC载体 ,转化重组体到大肠杆菌E .coli 2 5 6 6进行表达 ;采用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS PAGE和Westernblot鉴定表达纯化产物 ;用Dot ELISA分别检测了血吸虫病人及正常人的血清。结果 :重组的日本血吸虫铁蛋白以GMC(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ) 日本血吸虫铁蛋白融合蛋白的形式在细菌中得到高效表达 ,分子量为 4 0kD ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。用重组铁蛋白检测 30例日本血吸虫病人血清和 30例正常人血清 ,阳性率和假阳性率分别为 93 3%和 3 3%。结论 :成功地表达纯化日本血吸虫重组铁蛋白 ,且该蛋白具有一定的免疫诊断价值。
- 王敏易新元曾宪芳袁仕善李先平
- 关键词：日本血吸虫铁蛋白基因克隆免疫诊断
- 2019年衡阳市某三甲医院细菌分布及耐药性分析
- 2021年
- 目的:分析2019年衡阳市某三甲医院常见致病菌的分布及其对常用抗菌药物的耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法:使用VITEK2全自动仪器法进行菌株鉴定和药敏试验,根据CLSI 2019年版标准判读结果,使用软件WHONET 5.6进行数据分析。结果:2019年共收集临床非重复分离株8953株,其中革兰阳性菌占29%,革兰阴性菌占71%。位列前5的分离株分别为大肠埃希菌(19.8%)、鲍曼不动杆菌(17.7%)、肺炎克雷伯菌(14.5%)、铜绿假单胞菌(10.0%)、肺炎链球菌(6.7%)。肺炎克雷伯菌耐药情况比大肠埃希菌严重,对于哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、阿米卡星、亚胺培南和厄他培南,大肠埃希菌保持高度敏感性(>90%),而肺炎克雷伯菌仅对厄他培南高度敏感(100%)。鲍曼不动杆菌对大多数抗菌药物耐药性都较强(>75%),对亚胺培南的耐药率更是高达84.4%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的检出率分别为37.9%和78.9%,耐万古霉素、利奈唑胺的葡萄球菌未检出。结论:该院临床分离菌对常用抗菌药物耐药率较高,耐药菌以革兰阴性细菌为主,鲍曼不动杆菌耐药最为严重。
- 陈心怡胡楚婷王秋平任林袁仕善
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- 目的:分析弓形虫致密颗粒蛋白GRA8真核表达质粒的体外表达。方法:大量提取纯化重组真核表达质粒pVAX1-GRA8,瞬时转染培养的vero E-6细胞,RT-PCR和免疫印迹法检测GRA8在细胞中的表达。结果:从转染pVAX1-GRA8后的vero E-6细胞的RNA中扩增出GRA8的特异条带,转染细胞存在弓形虫感染血清识别的特异蛋白质条带。结论:真核表达质粒pVAX1-GRA8在vero E6细胞中获得表达。
- 钟志宏袁仕善
- 关键词：弓形虫真核表达质粒体外表达
- 弓形虫主要表面抗原1截短型片段的纯化与鉴定
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- 目的:表达和纯化弓形虫SAG1,分析其免疫原性。方法:将诱导表达SAG1后菌体裂解,离心,分别收集其上清和沉淀;亲和层析分离纯化裂解上清液中的SAG1,SDS-PAGE和Western blot鉴定SAG1纯度和免疫原性。结果:诱导后重组体pGEX-SAG1/Bl21超声裂解上清液、8M脲溶解沉淀的上清中都含有融合蛋白GST-SAG1,从超声裂解上清液中纯化获得融合蛋白GST-SAG1。结论:亲和层析获得具有免疫原性的SAG1。
- 杨盛清陈海明颜棠尹乐图袁仕善
- 关键词：弓形虫SAG1纯化免疫原性
- SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫被引量：2
- 2005年
- 目的构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N,免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体,为SARS疫苗的进一步研究打下基础。
- 林绮萍吴少庭翁亚彪袁仕善高世同秦莉雷明军潘晖榕张仁利黄达娜温见翔
- 关键词：SARSN基因真核表达质粒体液免疫
