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王东生
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- 所属机构:川北医学院附属医院
- 所在地区:四川省 南充市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
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- 周京国晏波王东生刑艳青玉凤蒋兴亮杜琴
- 文献传递
- 苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响被引量：26
- 2008年
- 目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。
- 钟梁刘北忠郝坡刘畅王东生王春光
- 关键词：苦参碱肺腺癌A549细胞细胞凋亡
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- 本实用新型公开了一种真空采血管，包括外管（3）、胶塞（2）、管盖（1），其特征在于：外管内套装有一内管（4），内管与外管为滑动配合，胶塞嵌接于内管内，内管底部设有一小于内管内径的通孔，一滤膜（5）嵌装于内管内并置于通孔之...
- 罗光成王东生易婷婷蒋兴亮郭小兰
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- 一种特异性信号采集和输出一体化的核酸探针及其应用
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- 文献传递
- 人K562细胞糖皮质激素受体基因阻断模型的建立
- 2008年
- 目的利用腺病毒载体介导的RNAi技术,建立糖皮质激素受体基因阻断的人K562细胞模型。方法将针对糖皮质激素受体发挥RNAi效应的合成寡核苷酸序列连入含有绿色荧光蛋白基因的腺病毒穿梭质粒pRNAT-H1·1/Adeno中,在含有pAdEasy-I病毒骨架的BJ5183大肠菌内进行同源重组;重组体通过脂质体介导转染293T细胞,并在293细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒,通过反复感染扩增病毒以达感染靶细胞的适当滴度,通过绿色荧光表达来监测腺病毒扩增;应用Western blot法检测人K562细胞感染病毒后糖皮质激素受体蛋白的表达。结果重组腺病毒穿梭质粒psiGR/Adeno和重组腺病毒pAdEasy-siGR的成功构建;转染腺病毒载体的293T细胞表达绿色荧光,随着时间逐渐增强并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增,病毒达到合适的滴度;受腺病毒感染的K562细胞内糖皮质激素受体蛋白表达明显降低。结论可以成功构建针对糖皮质激素受体基因的RNAi腺病毒载体,为进一步研究糖皮质激素受体的生物学功能奠定基础。
- 郝坡刘北忠孟凡萍欧阳峰王东生刘畅钟梁金丹婷王翀
- 关键词：K562细胞糖皮质激素受体腺病毒载体构建RNAI基因表达
- NLS-RARα相互作用蛋白的筛选与验证
- 第一部分NLS-RARα结合域诱饵表达载体的构建和鉴定
目的构建维甲酸受体变异蛋白/(NLS-RARα/)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统筛选与NLS-RARα相互作用的蛋白建立实验基础。
方法P...
- 王东生
- 关键词：白血病质粒构建诱饵蛋白白血病弹性蛋白酶免疫共沉淀相互作用
- 文献传递
- PML—RARα融合基因相关蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化
- 2017年
- 目的构建PML-RARα融合基因相关重组表达质粒，在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化。方法利用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）以PML-RARα全长质粒为模板分别扩增出长度均为1200bp的PML和RARα序列，并将它们分别插入PET32a（＋）质粒中，构建重组表达质粒，化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆，菌落PCR筛选阳性转化子，双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性。正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a（＋）和Flag-RARα-PET32a（＋）。将正确重组的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达，利用表达蛋白的组氨酸＂标签＂（His-tag）进行Ni2＋-树脂柱亲和层析纯化，SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质。结果PCR扩增获得目的基因，重组表达质粒经EcoRI／HindIII双酶切和测序鉴定证明构建正确。转化感受态BL21（DE3）并经诱导后得到高效表达，SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白。结论成功构建重组表达质粒，并经诱导表达后可纯化出目的蛋白，为进一步的抗体制备等实验奠定了基础。
- 杜琴蔡嘉镜蒋春萍徐磊张国元王东生
- 关键词：重组质粒蛋白纯化急性早幼粒细胞白血病
- 酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-PML-V的构建、表达及鉴定
- 2008年
- 目的:构建早幼粒细胞白血病基因变异蛋白(Promyelocytic leukemia,PML-V)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)筛选与PML-V相互作用的蛋白建立实验基础。方法:PCR扩增PML-V,克隆入诱饵载体pGBKT7中,经测序鉴定后,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PML-V转化到酵母细胞AH109中,并利用蛋白印迹法(Western Blotting)分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白有无毒性、渗漏和自激活作用。结果:成功扩增了PML-V基因片断,并克隆入pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,诱饵蛋白无毒性、渗漏和自激活作用,Western Blotting分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白。结论:成功构建了PML-V结合域的酵母诱饵表达载体,为进一步运用酵母双杂交技术筛选与之相互作用的蛋白奠定了基础。
- 钟梁王翀刘北忠王东生郝坡刘畅金丹婷王春光
- 关键词：质粒构建诱饵蛋白
- 动脉采血针
- 本发明公开了一种动脉采血针，包括针头（1）、针筒、活塞推拉杆（7），其特征在于：针筒分为针筒筒体（6）和针头连接座（12），针头连接座内嵌装有一硅胶单向阀（2），针筒筒体与针头连接座连接端一段为双层管，双层管管壁之间形成...
- 王东生罗光成马强易婷婷张国元
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