云涛
作品数： 126被引量：251H指数：7
  • 所属机构:浙江省农业科学院
  • 所在地区:浙江省 杭州市
  • 研究方向:农业科学
  • 发文基金:浙江省自然科学基金

相关作者

倪征
作品数：117被引量：244H指数：7
供职机构：浙江省农业科学院
研究主题：兔出血症病毒 呼肠孤病毒 鸭瘟病毒 病毒 兔病毒性出血症病毒
华炯钢
作品数：117被引量：219H指数：8
供职机构：浙江省农业科学院
研究主题：病毒 呼肠孤病毒 鸭瘟病毒 鸡新城疫 兔出血症病毒
陈柳
作品数：87被引量：98H指数：5
供职机构：浙江省农业科学院
研究主题：呼肠孤病毒 鸭瘟病毒 兔出血症病毒 病毒 基因
张存
作品数：133被引量：424H指数：8
供职机构：浙江省农业科学院
研究主题：鸭瘟病毒 呼肠孤病毒 病毒 基因 细菌人工染色体
叶伟成
作品数：101被引量：419H指数：9
供职机构：浙江省农业科学院
研究主题：鸭瘟病毒 呼肠孤病毒 病毒 细菌人工染色体 基因
作品列表
一种表达猪瘟病毒重组E2蛋白的重组伪狂犬病毒株及应用
本发明公开了一种表达猪瘟病毒重组E2蛋白的重组伪狂犬病毒株及应用，涉及生物技术领域。本研究以TK/gE双基因缺失PRV减毒株作为病毒载体，将去除跨膜区的外源CSFV E2基因插入到PRV gC信号肽序列之后，构建了位于g...
张存云涛孙阳阳陈柳朱寅初华炯钢叶伟成倪征
鸭呼肠孤病毒基因Ⅰ型与Ⅱ型RT-PCR鉴别诊断方法的建立与应用
云涛张存华炯钢余斌叶伟成陈柳倪征
表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性被引量：14
2016年
【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究,而近几年也有关于鸭瘟病毒(DEV)作为疫苗活载体的报道。为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段,本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上,构建表达小鹅瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重组病毒rDEV-VP2,并研究其生物学特性,进而探讨重组病毒rDEV-VP2作为防治DEV和GPV的二联重组活载体疫苗的可能性。【方法】将密码子优化的GPV VP2基因通过常规基因克隆的方法插入转移载体p EP-BGH-end,构建含有GPV VP2表达框p CMV-VP2-BGH-p A的重组表达质粒。在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,通过"Red E/T"两步重组法将GPV VP2基因表达框插入到DEV US7和US8基因之间构建了突变体克隆pDEV-VP2。利用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得重组病毒rDEV-VP2和删除Bac质粒序列的rDEV-VP2-Cre,并对重组病毒细胞体外生长曲线、蚀斑大小和VP2蛋白表达情况进行测定。将rDEV-VP2接种番鸭,在不同时间采集血清,采用间接ELISA法检测血清中GPV VP2抗体产生情况。【结果】间接免疫荧光检测和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs细胞成功表达。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果显示,rDEV-VP2在CEFs细胞上的增殖滴度与亲本株相比无显著差异,表明外源基因VP2的插入不影响rDEV重组病毒的增殖。动物试验结果表明,7日龄雏番鸭接种rDEV-VP2可以诱导产生针对GPV VP2的抗体,免疫后3周抗体阳性率为50%(4/8)。【结论】将小鹅瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因组的US7和US8基因间
陈柳余斌倪征华炯钢叶伟成云涛张存
关键词：鸭瘟病毒鹅细小病毒VP2重组病毒
一种规模化畜禽舍的自动循环消毒系统
本发明公开了一种规模化畜禽舍的自动循环消毒系统，属于畜禽养殖领域，包括设置在畜禽舍内的自动消毒轨道和安装在自动消毒轨道上的自动消毒小车，畜禽舍内地面上设有回收槽，回收槽包括消毒液槽和位于消毒液槽上侧的污泥槽，自动消毒小车...
倪征张存云涛陈柳叶伟成华炯钢朱寅初
番鸭呼肠孤病毒通用型RT-PCR检测引物及检测方法
本发明公开了一种番鸭呼肠孤病毒通用型RT-PCR检测引物及检测方法，属于鸭类病毒检测技术领域。该通用型RT-PCR检测引物为上游引物：5’-CACAGTGCTACCATC-3’，下游引物：5’-CTGCTGATCATAA...
叶伟成余斌张存云涛陈柳倪征华炯钢
文献传递
表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用
本发明公开了一种表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有小鹅瘟病毒VP2基因，所述小鹅瘟病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。所述构建方法包括：(1)将pDE...
陈柳张存倪征叶伟成余斌云涛华炯钢
文献传递
鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用被引量：6
2014年
为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒（DTMUV）抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku.Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件.重组抗原最适包被浓度为5 μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑.该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21％～7.27％和3.4％ ～7.2％,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性.用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3％.
余斌华炯钢刘跃生赵灵燕倪征叶伟成云涛陈柳徐辉张存
关键词：间接酶联免疫吸附试验
DEV囊膜糖蛋白gI基因缺失病毒生物学特性研究被引量：1
2014年
在构建鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体感染性克隆pDEV-vac的基础上,通过两步Red E/T重组,构建了gI基因缺失的pDEV-ΔgI突变体克隆,并转染鸡胚成纤维细胞获得了重组病毒rDEV-ΔgI。病毒生长曲线显示,rDEV-ΔgI的滴度从12 h到60 h稳步增加,在此期间gI基因缺失毒株病毒滴度较亲本毒株稍有降低,但病毒滴度于72 h接近并超过对照毒株。蚀斑面积测定发现rDEV-ΔgI较亲本毒rDEV-BAC增加约60%。动物实验表明,rDEV-ΔgI注射组对强毒攻击的保护率较对照组下降40%。研究表明:gI为DEV的非必需基因,且gI基因与病毒扩散、免疫保护能力等相关。
陈柳余斌倪征华炯钢叶伟成云涛张存
关键词：鸭瘟病毒GI
兔出血症病毒在体外诱导细胞凋亡
2009年
The apoptosis of RK13 cells induced by RHDV was investigated with DAPI staining,DNA ladder,Caspase 3 activity and flow cytometry,etc.The results showed that nuclear staining of infected cells with DAPI showed gradually morphological changes of the nuclei.As shown in the paper,a canonic oligonucleosome-sized DNA ladder was observed in cells harvested at 24h,48h and 72h post-infection,confirming that DNA fragmentation was induced by RHDV infection.The results of flow cytometry showed that about 63 % of cells were in apoptosis at 48h post-infection.Besides,we also demonstrated that the activation of Caspase 3 occurred during the infection process.In conclusion,our results showed that apoptosis in RHD might be determinant in the development of the pathogenesis of RHD.
倪征魏威刘光清陈柳余斌云涛华炯钢李双茂
关键词：兔出血症病毒凋亡CASPASE-3
慢病毒介导的稳定表达鸭干扰素-γ细胞株的构建
2024年
干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了30个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系。利用RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了duIFN-γ mRNA水平最高的1个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了1株稳定细胞系。Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中。本研究获得了1株稳定表达duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展duIFN-γ生物学功能研究、建立duIFN-γ检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础。
陈柳倪征刘可姝叶伟成华炯钢云涛朱寅初张存
关键词：慢病毒CHO细胞
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