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吴建新
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- 所属机构:首都儿科研究所
- 所在地区:北京市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
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- 王晓燕金春华吴建新刘卓李梅李娜
- 关键词：25-羟维生素D维生素D缺乏性佝偻病婴儿
- TGF-β和IGF-1信号通路调控肾母细胞瘤细胞增殖机制探讨被引量：7
- 2017年
- 目的肾母细胞瘤是一种高发的儿童实体瘤,发病率占儿童恶性肿瘤8%~10%,多发生于<5岁儿童,有研究表明某些信号通路可调控其增殖过程。本研究探讨TGF-β和IGF-1信号通路是否共同参与调控肾母细胞瘤细胞的增殖过程。方法采用siRNA转染实验将TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA转至肾母细胞瘤细胞株G401,以转染不同siRNA分为TGFBR1-siRNA组和IGF1R-siRNA组,siRNA无关序列(non-siRNA)转染组作为对照组,每组设6个复孔。MTS方法检测TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA对细胞增殖率的影响,蛋白质印迹法检测TGF-β信号通路TGFBR1及下游蛋白p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表达情况;蛋白质印迹法检测IGF-1信号通路IGF1R及下游蛋白p-AKT蛋白表达情况。ELISA法检测细胞上清中FGF9蛋白表达。结果抑制TGFBR1和IGF1R72和96h后,细胞的增殖率受到抑制,对照组增殖率设为100%。与其相比,转染TGFBR1-siRNA 72h后的实验组和对照组的增殖率分别为(80±14)%和(100±7)%,实验组低于对照组,P=0.034;转染IGF1R-siRNA 72h后实验组和对照组的增值率分别为(85±21)%和(100±7)%,实验组低于对照组,P=0.028。转染TGFBR1-siRNA 96h后的实验组和对照组的增殖率分别为(81±13)%和(100±11)%,实验组低于对照组,P=0.021;转染IGF1R-siRNA 96h后实验组和对照组的增殖率分别为(82±17)%和(100±11)%,实验组低于对照组,P=0.038。抑制TGFBR1后,与non-siRNA组相比,下游蛋白FGF-9、p-ERK、SMAD2/3和p-AKT明显受到抑制。TGFBR1-siRNA转染72h后,实验组细胞上清中FGF9蛋白表达量显著下降,实验组为(533.85±54.64)ρg/mL,对照组为(587.34±46.83)ρg/mL,P=0.041;96h后实验组FGF9蛋白表达量仍显著低于对照组,实验组为(495.03±59.26)ρg/mL,对照组为(605.34±49.28)ρg/mL,P=0.018。TGFBR1-siRNA转染48h后,p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表达量出现降低;72h后,p-ERK和SMAD2/3蛋白表达量仍降低。与non-siRNA转染对照组相比,IGF1R-siRNA转染72和96h后,p-AKT蛋白表达量出现降低。�
- 刘卓何峰李媛媛欧阳胜荣曹丁丁常会波马斐斐吴建新
- 关键词：肾母细胞瘤信号通路IGF1R肿瘤增殖
- 肺炎支原体P1蛋白抗原决定簇在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：4
- 2004年
- 目的 得到肺炎支原体主要粘附蛋白 (P1蛋白 )的表达蛋白。材料与方法 用PCR产物限制性片段长度多肽性(RFLP)分析等方法鉴定实验用肺炎支原体菌株。针对P1蛋白基因设计上、下游引物 ,进行PCR扩增。对PCR产物进行回收、纯化 ,克隆入PET - 2 8C(+)表达载体 ,并转化入宿主菌BL2 1。对重组质粒进行酶切及PCR鉴定后 ,IPTG诱导目的蛋白在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,并以Ni-Agarose亲和层析柱纯化。结果 1)本实验所用菌株为肺炎支原体 2型。 2 )经PCR扩增得到预期含有BamHI和XhoI的 5 33bp的目的片段。 3)完成目的基因片段的克隆与表达 ,得到 2 0kDa左右表达蛋白。经诱导阳性质粒的蛋白表达 ,得到较大量纯化的目的蛋白。结论 本研究以国际标准株FH为模板 ,成功获得纯化的近 2 0kDa的P1蛋白片段 ,其大小与目的片段理论值相符 ,且此片段在肺炎支原体 1型与 2型中的基因同源性为 98%。为在基因和蛋白水平进一步研究肺炎支原体P1蛋白成分在肺炎支原体粘附和引起机体免疫反应中的作用机制 ,打下了良好的基础。
- 孙红妹包怡华赵汉青吴建新刘哲伟张霆郭章溉曹玉璞
- 关键词：肺炎支原体P1蛋白抗原决定簇大肠杆菌纯化
- 婴幼儿期血肌酸激酶检测对早期诊断杜氏肌营养不良价值
- 李媛媛刘卓欧阳胜荣邓莉王立文吴建新
- 文献传递
- 半乳糖血症患儿半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶基因突变的鉴定与分析被引量：4
- 2013年
- 目的从分子水平研究半乳糖血症患儿半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶基因（GALT基因）突变情况。方法选取2例确诊为半乳糖血症的患儿，分离其外周血淋巴细胞，提取总RNA，RT—PCR扩增GALT基因全长cDNA；将PCR产物亚克隆至T—easy载体，筛选阳性克隆并测序；同时，采用限制性片段多态性的方法将PCR产物进行酶切鉴定。结果2例患儿均出现了未报道过的突变。其中1例患儿GALT基因1006位A突变为G，导致M336V氨基酸突变；另1例患儿GALT基因779位A突变为T，导致H260L突变。这2例突变均为碱基替换形成的错义突变，且均为杂合型突变。结论基因诊断可提高半乳糖血症诊断的准确性，并为该病的产前筛查、造血干细胞移植甚至基因治疗提供有价值的参考。
- 王宇阳刘哲伟常会波王立文吴建新
- 关键词：半乳糖血症基因突变
- DNA甲基转移酶分类、功能及其研究进展被引量：42
- 2009年
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- 关键词：DNA甲基化DNA甲基转移酶
- 维生素D对冬季母乳喂养婴儿血清25-羟维生素D水平的影响被引量：8
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- 目的 了解常规口服鱼肝油对纯母乳喂养婴儿冬季血清25-羟维生素D［25（OH）D］水平的影响。方法 采用自身对照方法，于2009年12月至2010年2月，以首都儿科研究所附属儿童医院各项检查正常孕妇分娩的新生儿为对象，取脐带血2 ml，分离血清。新生儿自出生后第15天开始补充鱼肝油，随访至4个月，采集纯母乳喂养婴儿的空腹静脉血2 ml，分离血清，与脐带血清同时检测25（OH）D。结果 共43例纯母乳喂养婴儿，其中男26例，女17例。脐带血清25（OH）D为（20.9±5.1）nmol/L（12.5~32.1 nmol/L），维生素D缺乏率为100%。第4个月婴儿静脉血清25（OH）D为（106.3±42.4）nmol/L（30.2~208.5 nmol/L），其中4例＜50 nmol/L（维生素D缺乏率9.3%），7例50~75 nmol/L，25例75~150 nmol/L，7例＞150 nmol/L。血清25（OH）D水平与口服鱼肝油量呈正相关（r=0.530，P=0.001）。鱼肝油漏服率（漏服时间/应服时间）平均为36.1%（39/108），血清25（OH）D与漏服时间呈负相关（r=-0.634，P=0.001）。结论 北方冬季新生儿普遍存在维生素D缺乏，母乳喂养婴儿每日口服鱼肝油可显著提高血清25（OH）D水平，但漏服不能确保婴儿免于维生素D缺乏。
- 金春华王晓燕吴建新
- 关键词：维生素D缺乏25-羟维生素D母乳喂养婴儿脐带血
- 3~6岁儿童基本运动能力评估量表中国常模研究被引量：2
- 2022年
- 目的建立3~6岁儿童基本运动能力评估量表的中国常模,探讨其常模界值,为临床运用提供一项实用的评估工具。方法2020年8月—2021年5月,采取分层整群抽样的方法,使用3~6岁儿童基本运动能力评估量表获得全国六大行政区8个城市3~6岁儿童1616例,统计分析量表全部6个维度的常模得分和界值点。结果量表各维度得分比较,差异具有统计学意义(F=10.96~117.77,P<0.001)。量表总分ROC曲线下面积为0.937,95%CI为0.916~0.957。最大约登指数(YI)=0.74,其对应的量表总分在常模中位于第17百分位(P_(17)),常模的灵敏度为0.871,特异度为0.864。当分别以P_(15)(76)和P_(20)(80)为界值点时,YI分别为0.69和0.72,灵敏度和特异度皆>0.8。结论本研究常模样本具有良好的代表性,制定的界值点适当,对评估3~6岁儿童基本运动能力具有很好的临床运用价值,可推广运用。
- 何彦璐杨志勇刘丰董文红匡晓妮张雪娇王念蓉骆艳杨琳王晓娟吴建新张霆朱宗涵王健关宏岩童梅玲
- 关键词：基本运动能力量表常模儿童
- 小儿扁桃体淋巴细胞Poly(A)-RNA的制备及其cDNA的合成
- 1989年
- 采用盐酸胍法从经PHA诱导的小儿扁桃体淋巴细胞中提取总RNA,经Oligo(dT)-纤维素柱层析制备了Poly(A)-RNA。经蔗糖线性密度梯度超速离心步骤,富集了含IL-2mRNA的Poly(A)-RNA。经麦胚无细胞体系翻译实验表明,富集后的Poly(A)-RNA具有良好的模板翻译活性,其~3H-亮氨酸参入活性是对照的5.1倍。又以此富集了的Poly(A)-RNA为模板,按照Watson和Jackson的最新方法合成了小儿扁桃体淋巴细胞的双链cDNA。经碱性凝胶电泳检查,用此方法合成的cDNA长度最长的超过了IL-2的cDNA长度。
- 吴建新安文谦吴竹照王正森胡美浩
- 关键词：CDNA淋巴细胞
