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柚皮素介导Ras同源基因家族成员A/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1通路对人结直肠癌HT-29/奥沙利铂耐药细胞株的影响 2024年 目的探讨柚皮素介导Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)通路对人结直肠癌细胞株HT-29对奥沙利铂(L -OHP )化疗敏感性的作用。方法取人结直肠癌细胞株HT-29,建立稳定的耐药细胞株HT-29/L -OHP ,接种至96孔板中,调整细胞浓度至1.0×10^(5)个/mL ,设置4组,分别为空白组、L -OHP 组、柚皮素组、柚皮素+L -OHP 组,每组6个复孔。L -OHP 组予以5μmol /L L -OHP 2μL ,柚皮素组予以100μmol /L 柚皮素2μL ,柚皮素+L -OHP 组予以100μmol /L 柚皮素2μL +5μmol /L L -OHP 2μL ,空白组仅予以无菌0.9%氯化钠注射液。噻唑兰(MTT)法检测各组细胞活力和半抑制浓度(IC50);实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组细胞RhoA、ROCK1、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、抗凋亡因子B细胞淋巴瘤-2(Bcl -2)mRNA表达;蛋白免疫印迹法检测各组细胞RhoA、ROCK1、MRP1、Bcl -2蛋白表达。结果成功构建人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L -OHP ;与空白组和L -OHP 组比,柚皮素组和柚皮素+L -OHP 组细胞增殖能力下降,IC50值降低,RhoA、ROCK1、MRP1、Bcl -2 mRNA及蛋白表达降低,比较差异均有统计学意义(P<0.05),且空白组上述指标与L -OHP 组比较、柚皮素组上述指标与柚皮素+L -OHP 组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柚皮素能显著降低人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L -OHP 的增殖能力,提高其对L -OHP 的化疗敏感性,推测与抑制RhoA、ROCK1、MRP1、Bcl -2的表达有关。 郑才勇 于冬 李永春关键词:柚皮苷 SL FN11基因表达对SW480细胞L -OHP 敏感度的影响 2023年 目的探讨SL FN11基因表达对奥沙利铂抑制结直肠癌细胞株SW480生长的影响。方法通过SL FN11基因沉默(siRNA)降低SL FN11基因表达水平,并通过RT-qPCR和Western bl ot法方法鉴定SL FN11基因mRNA和蛋白表达水平;利用MTT实验验证奥沙利铂对SW480细胞株生长增殖的影响;通过流式细胞仪检测SW480细胞周期及细胞凋亡情况。结果siRNA干扰可特异性地显著降低SW480细胞株SL FN11基因的表达和蛋白表达水平,MTT实验发现SL FN11基因沉默组较基因未干扰组,奥沙利铂对SW480细胞株的生长抑制明显减低(P<0.05),而且减弱奥沙利铂对SW480细胞株的细胞凋亡的诱导(P<0.01),减少G 2/M期细胞周期阻滞(P<0.01)。结论SL FN11基因低表达可以降低SW480细胞对奥沙利铂的敏感度,可能预测奥沙利铂治疗结直肠癌细胞的疗效。 田力 张宁坤 杨璐 夏菁 彭朝胜关键词:结直肠癌 奥沙利铂 细胞周期 吴茱萸碱逆转人胃癌BGC-823/L -OHP 细胞对奥沙利铂耐药 2023年 目的:探究奥沙利铂(L -OHP )与吴茱萸碱(EVO)联用后对L -OHP 耐药的人胃癌BGC-823/L -OHP 细胞增殖与凋亡能力的改变及可能机制。方法:于体外建立对L -OHP 耐药的胃癌BGC-823细胞株,CCK-8法分别计算EVO及L -OHP 单独使用与联合使用时BGC-823/L -OHP 细胞的增殖抑制率、IC50及逆转指数;流式细胞仪检测EVO联合L -OHP 作用于BGC-823/L -OHP 细胞前后细胞周期分布及凋亡的变化;采用Real -timePCR、Westernbl ot法检测细胞中MDR1、MRP1mRNA和蛋白的表达水平。结果:2.00μmol /L EVO处理BGC-823/L -OHP 细胞48h后,L -OHP 对BGC-823/L -OHP 耐药细胞株的IC50由(18.83±0.83)μg/ml 变为(12.78±1.78)μg/ml ,差异有统计学意义(P<0.05);EVO与L -OHP 联用耐药细胞滞留在G2期比例升高,滞留在G1期及S期的细胞比例降低(P<0.05);细胞凋亡率高于单独用药组(P<0.05);MDR1、MRP1mRNA和蛋白表达水平低于单独用药组(P<0.05)。结论:EVO和L -OHP 联用能逆转BGC-823/L -OHP 对L -OHP 的耐药性并改变其周期分布,促进细胞凋亡。 王庆康 张晨嵩 潘成武 李靖 谢波 汪虎 马家驰关键词:胃癌 吴茱萸碱 细胞周期 miR-1180基因沉默介导Wnt通路增强人结肠癌耐药细胞株THC8307/L -OHP 化疗的敏感性 2022年 目的探讨微小核糖核酸-1180(miR-1180)基因沉默介导Wnt通路增强人结肠癌耐药细胞株THC8307/奥沙利铂(L -OHP )化疗敏感性的作用。方法设计并构建miR-1180 inhibitor、NC inhibitor慢病毒载体,采用脂质体转染法将其转染至人结肠癌耐药细胞株THC8307/L -OHP 内,分别记为沉默组和对照组,另取未转染细胞记为空白组,每组6个复孔。转染48 h后,荧光显微镜下观察计算沉默组和对照组细胞转染效率。分别在细胞培养液中加入0、3.13、6.25、12.5、25、50μmol /mL 的L -OHP 作用48 h,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力和对L -OHP 的半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-1180表达及Wnt、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cycl inD1)、多药耐药基因1(MDR1)、抗凋亡因子(Bcl -2)信使核糖核酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组细胞Wnt、β-catenin、Cycl inD1、MDR1、Bcl -2蛋白表达;双荧光素酶活性实验验证miR-1180靶向调控Wnt。结果对照组和沉默组转染效率分别为(93.51±1.89)%、(94.09±2.26)%。与空白组和对照组比,沉默组细胞活力、IC_(50)值降低,细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且空白组和对照组细胞活力、IC_(50)值、细胞凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05);与空白组和对照组比,沉默组miR-1180表达、Wnt、β-catenin、Cycl inD1、MDR1、Bcl -2mRNA及蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且空白组和对照组miR-1180表达、Wnt、β-catenin、Cycl inD1、MDR1、Bcl -2mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-1180基因沉默可显著降低人结肠癌耐药细胞株THC8307/L -OHP 的细胞活力,提高化疗敏感性,推测是通过靶向Wnt信号通路,抑制Wnt、β-catenin、Cycl inD1、MDR1、Bcl -2的表达实现此作用的。 苍宏宇 郝灵芳 梁润关键词:结肠癌 化疗敏感性 5-氮杂-2:脱氧胞苷调控ERCC1和hML H1表达逆转结肠癌细胞奥沙利铂耐药的机制 被引量:1 2021年 目的通过构建结肠癌耐奥沙利铂细胞株(HCT116/L -OHP ),探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)逆转奥沙利铂耐药的可能机制及其与切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、人类错配修复基因1(hML H1)的关系。方法采用奥沙利铂浓度梯度递增法,建立耐奥沙利铂的细胞株HCT116/L -OHP ,CCK法筛选出奥沙利铂、5-Aza-CdR对各组细胞的半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹法分别检测使用5-Aza-CdR处理细胞前后ERCC1、hML H1基因和蛋白表达水平。结果成功构建了稳定耐奥沙利铂细胞株HCT116/L -OHP ,选取5μmol /L 5-Aza-CdR和100 mg/L 奥沙利铂行体外敏感性实验,随着时间延长,各组对HCT116/L -OHP 细胞株增殖抑制率呈上升趋势,5-Aza-CdR联合奥沙利铂组增殖抑制率较高,药物和时间的作用效应存在交互作用,F分组=89.743,P<0.001;F时间=28.249,P<0.001;F分组×时间=42,785,P<0.001。经5-Aza-CdR联合奥沙利铂处理HCT116/L -OHP 24 h后细胞凋亡结果显示,联合用药组相对于奥沙利铂单药组的细胞凋亡率由(17.94±1.58)%上升至(34.88±2.15)%,两药存在协同性的交互作用,F=48.232,P<0.001。RT-PCR结果显示,HCT116对照组、HCT116/L -OHP 组和5-Aza-CdR处理组ERCC1基因水平分别为1.54±0.08、1.85±0.07和1.72±0.06,F=254.126,P<0.001;hML H1水平分别为1.14±0.07、0.81±0.05和1.02±0.06,F=156.827,P<0.001。蛋白质印迹结果显示,HCT116对照组、HCT116/L -OHP 组和5-Aza-CdR处理组ERCC1水平分别为0.29±0.03、0.80±0.05和0.54±0.02,F=251.274,P<0.001;hML H1水平分别为0.56±0.08、0.46±0.05和0.76±0.09,F=153.683,P<0.001。结论 5-Aza-CdR可明显抑制奥沙利铂作用下人结肠癌耐药细胞株HCT116/L -OHP 的增殖作用,诱导凋亡,其作用可能与影响ERCC1和hML H1表达有关。 张修振 闫燕 杨勇进 陈成武 亓玉琴 刘吉勇Effect of ATM/CHK2/CDC25A Signal Pathway on the Resistance of Col orectal Cancer Cel l s to L -OHP 被引量:1 2021年 [Objectives]To compare the expression of key factors ATM,CHK2,CDC25A and CDK2 in ATM/CHK2/CDC25A signal pathway in col orectal cancer cel l l ine HCT116 and L -OHP -resistant cel l l ine HCT116/L -OHP ,and to expl ore the rel ationship between ATM/CHK2/CDC25A signal pathway and resistance of col orectal cancer cel l s to L -OHP .[Methods]RT-qPCR was used to detect the expression of ATM,CHK2,CDC25A and CDK2 mRNA in col orectal cancer cel l l ine HCT116 and L -OHP -resistant cel l l ine HCT116/L -OHP ,and Western bl ot was used to detect the expression of corresponding proteins in these two cel l l ines.[Resul ts]The expression of ATM,CHK2,CDC25A,CDK2 mRNA and protein in HCT116/L -OHP was significantl y higher than that in HCT116.[Concl usions]ATM/CHK2/CDC25A signal pathway was associated with resistance of col orectal cancer cel l l ine HCT116 to L -OHP .Bl ocking this signal pathway may partial l y reverse the chemotherapy resistance of col orectal cancer patients with L -OHP resistance. Xiaoli YAN Peng YAN Jing XUE Yanfang FAN Jining ZHENG关键词:ATM CHK2 CDC25A 不同剂量L -OHP 化疗方案治疗大肠癌的效果和神经毒副作用 2021年 目的分析不同剂量奥沙利铂(L -OHP )化疗方案对大肠癌患者的疗效及神经毒副作用的影响。方法选取南阳医学高等专科学校第一附属医院2017年4月至2019年12月收治的大肠癌患者86例,按时间先后顺序分为参照组(2017年4月至2018年6月)和研究组(2018年7月至2019年12月),各43例。两组均实施奥沙利铂(L -OHP )+5氟尿嘧啶(5FU)+亚叶酸钙(CF)治疗,参照组L -OHP 用量为120 mg/m2,研究组L -OHP 用量为60 mg/m2,对比两组化疗效果、远期生存率及神经毒副作用发生率。结果参照组治疗有效率为83.72%,研究组治疗总有效率为81.40%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组1年期、3年期、5年期生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组神经毒副作用发生率(18.60%)低于参照组(39.53%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论同标准剂量下的L -OHP 化疗方案相比,小剂量L -OHP 化疗方案亦可获得相同治疗效果,且神经毒副作用小,更具应用价值。 黄丹关键词:奥沙利铂 大肠癌 有效率 蒽醌衍生物C2逆转结肠癌细胞HCT116/L -OHP 耐药性及机制研究 使用化疗的方法抑制和破坏癌细胞是临床上治疗结肠癌的主要方法之一。然而,在治疗晚期结肠癌患者时,由于长期处在化学药物的刺激压迫之下,常常会使患者对药物的敏感度变差,产生多药耐药性,最终导致化疗失败。因此,迫切需要开发新的安... 秦毓关键词:耐药细胞 文献传递 长链非编码RNA OR3A4促进结直肠癌细胞奥沙利铂耐药 被引量:2 2021年 目的:探讨长链非编码RNA(l ong non-coding RNA,l ncRNA)OR3A4在结直肠癌细胞奥沙利铂(L -OHP )耐药中的作用。方法:实时荧光定量(qPCR)检测结直肠癌组织和细胞中l ncRNA OR3A4的表达。免疫印迹(Western bl otting)检测OR3A4对耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-GP)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响。利用细胞计数试剂盒(cel l counting kit,CCK-8)检测半数抑制浓度(IC 50)。结果:结直肠癌组织/细胞株中OR3A4的表达水平显著高于癌旁组织/正常结肠细胞株(P<0.05)。L -OHP 耐药组的结直肠癌细胞的IC 50显著高于非耐药组,而且L -OHP 耐药组中OR3A4的表达水平显著高于非耐药组(P<0.05)。转染OR3A4小干扰RNA的结直肠癌L -OHP 耐药细胞中耐药蛋白表达水平以及IC 50均显著低于未转染组(P<0.05)。结论:l ncRNA OR3A4促进结直肠癌细胞的奥沙利铂耐药性。 李祎龙 郭亚娟 杨洁 王珩杨 乔伟 郭永峰关键词:结直肠癌 耐药 奥沙利铂 进展期胃癌D2根治术后L --OHP 联合口服氟尿嘧啶类药物辅助化疗完成率的影响因素分析和预后研究 目的:分析进展期胃癌D2根治术后奥沙利铂(L -OHP )联合口服氟尿嘧啶类药物辅助化疗完成率的影响因素以及其对预后的影响。 方法:回顾性分析2012年1月1日至2021年1月1日在厦门大学附属第一医院行D2根治性胃切除术... 潘梦婷关键词:进展期胃癌
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