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一种适用于细胞爬片的HEK-293细胞株及其构建方法和应用
本发明专利涉及细胞工程领域,具体涉及一种适用于细胞爬片的HEK293细胞株及其构建方法和应用。其构建方法包括:将整合素基因通过基因转染的方式整合至HEK293细胞株中得适用于细胞爬片的HEK293细胞株,整合素基因...
金立方陈萍傅国权
乳酸脱氢酶基因调控对HEK-293细胞代谢和腺病毒生产的影响
2023年
减少乳酸积累一直是哺乳动物细胞生物技术产业的一个目标。体外培养动物细胞时,乳酸积累主要是2种代谢途径作用的综合结果:一方面,葡萄糖在乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的作用下生成乳酸;另一方面,乳酸可通过乳酸脱氢酶B(LDHB)或乳酸脱氢酶C(LDHC)氧化为丙酮酸重新进入三羧酸循环。本研究综合评估了乳酸代谢关键基因调控对人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293 cells,HEK-293)细胞生长、代谢和人腺病毒(human adenovirus,HAdV)生产的影响,有效提高了HEK-293细胞的HAdV生产能力,并为哺乳动物细胞的乳酸代谢工程调控提供了理论基础。通过改造乳酸代谢关键调控基因(敲除ldha基因以及过表达ldhb和ldhc基因),有效改善了HEK-293细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HAdV的生产。与对照细胞相比,3个基因改造均能促进细胞生长,降低乳酸和氨的积累,明显增强细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HEK-293细胞的HAdV生产能力。ldhc基因过表达对HEK-293细胞的生长、代谢和HAdV生产调控最显著,最大细胞密度提高了约38.7%,乳酸对葡萄糖得率和氨对谷氨酰胺得率分别下降了33.8%和63.3%,HAdV滴度提高了至少16倍。此外,相比于对照细胞株,改造细胞株的腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)生成速率、ATP/O_(2)比率、ATP与腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)的比值以及还原型辅酶Ⅰ(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量均有不同程度的提高,能量代谢效率明显改善。
缪俊青易小萍李祥超庄英萍
关键词:乳酸脱氢酶物质代谢能量代谢腺病毒
1.PgLPS对HEK-293细胞增殖与HIF-1α及ICAM-1表达的研究2.PgLPS对HIF-1α敲除HEK-293细胞ICAM-1蛋白表达影响 3.牙周手术在口腔治疗中的应用
第一部分:不同浓度PgLPS对HEK-293细胞增殖与缺氧诱导因子-1α及ICAM-1表达的研究。背景:牙周炎是一种由口腔微生物感染引起的,以支持牙列的结缔组织和牙槽骨为目标的慢性感染性疾病。其通常会导致牙周软组织炎症、...
洪裕程
关键词:细胞间黏附分子-1牙周手术口腔治疗
提高β-2微球蛋白在HEK-293细胞中表达水平的细胞转染培养方法
本发明涉及重组蛋白领域,具体公开了一种提高β‑2微球蛋白在HEK293细胞中表达水平的细胞转染培养方法,包括以下步骤:步骤1,活化HEK293细胞并传代培养,选择转染细胞;步骤2,往转染细胞中兑入培养液,稀释细胞密度...
李长路
提高β-2微球蛋白在HEK-293细胞中表达水平的细胞转染培养方法
本发明涉及重组蛋白领域,具体公开了一种提高β‑2微球蛋白在HEK293细胞中表达水平的细胞转染培养方法,包括以下步骤:步骤1,活化HEK293细胞并传代培养,选择转染细胞;步骤2,往转染细胞中兑入培养液,稀释细胞密度...
李长路
一种HEK-293细胞无血清和悬浮培养的制备方法及其应用
本发明提供一种HEK293细胞无血清和悬浮培养的制备方法及其应用,包括一种HEK293细胞的无血清和悬浮培养的制备方法、所述制备方法获得的细胞系以及所述细胞系的应用。所述制备方法传代次数少,驯化效率高,获得的细胞活率...
孙秀莲
伏立康唑对HEK-293细胞中快速延迟整流钾通道及电压门控钠通道表达和功能的影响
2022年
目的观察伏立康唑对快速延迟整流钾通道(hERG)及电压门控钠通道(Nav1.5)表达和功能的影响。方法分别用浓度为0,2.5,5,10,50μmol/L伏立康唑干预稳定表达hERG通道蛋白及Nav1.5通道蛋白的HEK-293细胞24 h,Western blot检测hERG及Nav1.5的表达水平。用5μmol/L伏立康唑干预稳定表达Nav1.5的HEK-293细胞,分别干预0,2,4,8,16,24 h,Western blot检测Nav1.5的表达水平。用0,5,10μmol/L伏立康唑干预稳定表达hERG通道及Nav1.5通道的HEK-293细胞24 h,全细胞膜片钳技术检测hERG通道及Nav1.5通道的电流密度。以0μmol/L伏立康唑组为对照组,比较不同浓度伏立康唑对hERG及Nav1.5蛋白表达和通道功能的影响。结果与0μmol/L相比,2.5,5,10,50μmol/L伏立康唑干预24 h,Nav1.5蛋白表达水平增加(P<0.05),hERG蛋白的表达水平不受影响(P>0.05)。随着5μmol/L伏立康唑干预时间延长,Nav1.5蛋白的表达水平增加(P<0.05)。与0μmol/L相比,5μmol/L和10μmol/L的伏立康唑干预24 h,峰值钠电流及晚钠电流水平增加(P<0.05),但快速延迟整流钾电流水平没有明显变化(P>0.05)。结论伏立康唑干预可以浓度及时间依赖性增加Nav1.5的表达水平,增加峰值钠电流及晚钠电流水平,但不影响hERG蛋白的表达及快速延迟整流钾电流水平。
宁菲菲罗玲吴燕王娅马爱群王亭忠
关键词:伏立康唑电压门控钠通道心律失常
GATA5抑制EpCAM表达对肾癌HEK-293细胞系的影响
2021年
目的研究GATA5对肾癌HEK-293细胞系增殖调控及对细胞重编程因子EpCAM表达的影响。方法构建pTT5-GATA5表达载体并进行基因序列测序验证;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率;细胞划痕实验检测细胞划痕修复情况;实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测蛋白表达。结果GATA5抑制HEK-293细胞增殖;GATA5抑制HEK-293细胞划痕修复;GATA5抑制EpCAM的mRNA和蛋白表达。结论GATA5可以抑制肾癌细胞HEK-293细胞的增殖率并抑制EpCAM表达。
刘诚石嵩陈文关建民
关键词:EPCAMHEK-293细胞肾癌
HEK-293细胞培养过程中支原体污染处理初探被引量:3
2021年
为探索出HEK-293细胞培养中支原体污染的快速清除方法,通过大环内酯类和四环素类2种抗生素药物的单独、交替及联合使用对污染的HEK-293细胞进行处理,应用DNA荧光染色及PCR检测,比较处理前与处理后支原体污染的情况有无改善。检测结果显示,通过10 mg/mL浓度的大环内酯类和四环素类2种药物交替使用各4 d,处理2个周期后的HEK-293细胞中支原体污染已被清除。结果表明,通过10 mg/mL的大环内酯类和四环素类2种抗生素药物的交替使用,使HEK-293细胞培养过程中的支原体污染得到有效的控制,为细胞研究及疫苗工业生产奠定了基础。
易蓉鑫杨齐之贤梁易晓周祖灵孙永科杨玉艾
关键词:细胞培养支原体PCR检测
一种HEK-293细胞无血清和悬浮培养的制备方法及其应用
本发明提供一种HEK293细胞无血清和悬浮培养的制备方法及其应用,包括一种HEK293细胞的无血清和悬浮培养的制备方法、所述制备方法获得的细胞系以及所述细胞系的应用。所述制备方法传代次数少,驯化效率高,获得的细胞活率...
孙秀莲
文献传递

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孙晓燕
作品数:4被引量:0H指数:0
供职机构:郑州大学基础医学院
研究主题:丙泊酚 HERG钾通道 HEK-293细胞 无义突变 突变
郭海宁
作品数:19被引量:37H指数:5
供职机构:军事医学科学院军事兽医研究所
研究主题:重组腺病毒 生物反应器 微载体培养 重组痘苗病毒 流感
汪海
作品数:467被引量:1,657H指数:20
供职机构:北京赛德维康医药研究院
研究主题:盐酸埃他卡林 ATP敏感性钾通道 埃他卡林 烟碱 内皮细胞
陈玉萍
作品数:7被引量:29H指数:3
供职机构:军事医学科学院毒物药物研究所
研究主题:钾通道 埃他卡林 膜片钳技术 KATP通道 HEK-293细胞
张卫
作品数:376被引量:2,458H指数:24
供职机构:郑州大学第一附属医院
研究主题:芬太尼 术后镇痛 瑞芬太尼 舒芬太尼 麻醉