搜索到154篇“ BAC-TO-BAC系统“的相关文章
- 利用BmNPV Bac--to--Bac系统在家蚕体内表达狂犬病毒M蛋白及抗体制备
- 杆状病毒表达载体系统（Baculovirus Expression Vector System，BEVS）是将外源目的基因导入杆状病毒基因组，获得重组病毒，然后以此作为载体感染昆虫幼虫或其培养细胞。Bac-to-Bac表...
- 郭望
- 关键词：抗体制备杆状病毒表达系统家蚕生物反应器
- 文献传递
- 应用Bac-to-Bac系统高效表达人类错配修复基因hMLH1及其错义突变体
- 2017年
- 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中实现人类错配修复基因h MLH1及其错义突变体的高效表达。方法分别用Bam HI和Not I双酶切构建于pc DNA载体中的全长野生型h MLH1基因及T117M和V384D错义突变型DNA片段,回收后定向克隆至p Fast Bac1转座载体中,经酶切鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,提取重组Bacmid,反复感染Sf9昆虫细胞,用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定目的蛋白的表达。结果提取转染72h后的Sf9细胞总蛋白,用7%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见分子量为85k Da清晰的蛋白条带,经Western blot方法证实该条带为h MLH1基因的表达产物。结论利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中大量表达出h MLH1野生型和T117M及V384D错义突变体蛋白,为进一步开展体外错配修复实验奠定了良好的基础。
- 郭嘉义张燕满耕孝朱明星黄卫东
- 关键词：HMLH1基因
- 甘蓝夜蛾核型多角体病毒Bac-to-Bac系统的构建
- 2016年
- 甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mamestra brassicae multiple nucleopolyhedrovirus MbMNPV)作为广谱杆状病毒生物杀虫剂已广泛应用。本文成功构建一个能在多种商品化昆虫细胞中进行外源蛋白表达和基因工程操作的Ⅱ组甲型杆状病毒Bac-to-Bac表达载体系统,该系统能在Tn368细胞中表达回复的病毒多角体蛋白,也可高效表达其他外源蛋白。该系统的建立为MbMNPV广谱杀虫特性机制研究及重组高效广谱杆状病毒株构建提供便利工具,具有商业开发价值。
- 吴柳柳张忠信
- 家蚕杆状病毒DNA聚合酶在Bac-to-Bac系统的表达及活性检测
- 2016年
- DNA复制是杆状病毒生活史中最重要的事件,其中DNA聚合酶是病毒复制过程的关键酶。从家蚕杆状病毒(Bm NPV)基因组PCR扩增获得DNA聚合酶基因Bm NPV-pol的序列,利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒v Bm NPV-POL,并感染家蚕5龄幼虫,通过SDS-PAGE和Western blotting检测重组Bm NPV-POL蛋白在蚕体内成功表达,经Ni-NTA柱纯化获得了纯度较高的重组Bm NPV-POL蛋白。以poly(d A)/oligo(d T)为模板,比较在原核细胞和家蚕杆状病毒表达系统获得的重组Bm NPV-POL蛋白的酶活性,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组Bm NPV-POL的酶活性明显较高。利用家蚕杆状病毒表达系统简便、快速获得重组Bm NPV-POL蛋白,有助于后续对Bm NPV复制机制的研究。
- 陈慧卿楚茨周亚竟
- 关键词：DNA聚合酶重组蛋白酶活性
- Bac-to-Bac系统双表达mChIL18基因和H5亚型AIV HA1基因及其免疫原性
- 2016年
- 为了制备禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)基因工程亚单位疫苗,将其HA1基因和鸡IL-18成熟蛋白基因(mChIL-18)分别或先后插入到双表达载体pFastBacTM Dual中,表达单表达或双表达蛋白pHA1、pIL18和pHA1-IL18。将表达蛋白和/或禽流感二价(H5+H7)灭活疫苗通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄SPF鸡,2周后加强免疫1次。结果显示,pHA1-IL18、pHA1+pIL18、pIL18+禽流感疫苗、禽流感疫苗和pHA1免疫雏鸡后均能促进CD4+T、CD8+T细胞的增殖和抗体水平的增加,且pHA1-IL18免疫组要优于pHA1+pIL18混合免疫组及其他免疫组和对照组,差异显著(P<0.05)。结果表明,pHA1-IL18可以产生比pIL18+pHA1更强的免疫原性,为新型疫苗的研制奠定基础。
- 孔娜
- 关键词：HA1基因免疫原性
- 马尾松毛虫质型多角体病毒非结构蛋白p44在Bac-to-Bac系统中的表达和亚细胞定位
- 2016年
- 为探寻马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV 1)p44蛋白的功能,构建了DpCPV 1基因组S8片段的原核表达体系,表达纯化蛋白后免疫家兔制备了多克隆抗体。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建了3种重组的杆状病毒质粒(Bacmid-p44、Bacmid-p44-e GFP和Bacmid-e GFP)。转染昆虫细胞Sf9进行表达,通过Western blot检测和蛋白的亚细胞定位观察。Western blot检测结果显示,Bacmid-S8在昆虫细胞Sf9中表达实际蛋白的大小为35 kD,比在原核系统中表达的蛋白(44 k D)略小;利用激光共聚焦显微镜观察p44-e GFP的融合蛋白的亚细胞定位发现,融合p44的绿色荧光蛋白(eGFP)主要聚集在细胞质中,而未融合的eGFP则分布于整个细胞,说明DpCPV 1的p44蛋白定位于细胞质中。
- 彭晗王洪秀王金昌关丽梅靳亮万翠香
- 关键词：马尾松毛虫质型多角体病毒真核表达细胞定位
- Bac-to-Bac系统双表达蛋白IBDV VP2-IL-18免疫原性的研究被引量：2
- 2015年
- 把用Bac-to-Bac系统单表达或双表达的蛋白IL-18、传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2和IBDV VP2-IL-18与IBD疫苗同时腿部肌肉多点注射免疫14日龄SPF鸡,14d后加强免疫1次;免疫前、后均采血检测外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞数量和ELISA抗体效价。二免后第21天用vvIBDV-GX8/99毒株进行攻毒。结果显示,VP2-IL-18、VP2+IL-18、IL-18+IBD疫苗、VP2分别免疫雏鸡后均能促进CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖和抗体水平的增加,能明显增强攻毒保护率,但VP2-IL-18免疫组要优于VP2+IL-18混合免疫组及其他免疫组和对照组,差异显著(P<0.05)。上述结果表明,双表达蛋白VP2-IL-18不仅能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫,而且还可以产生较高保护率,为新型IBD疫苗的研制奠定了基础。
- 孔娜
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2IL-18免疫原性
- Bac-to-Bac系统表达鹿源BVDV E2蛋白及其免疫原性被引量：3
- 2014年
- 为了制备针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体,本试验通过RT-PCR技术扩增出鹿源BVDV E2的全长基因,并将其插入杆状病毒bac to bac表达系统的供体质粒pFast BacHTA中,构建含有BVDV E2基因的重组供体质粒pFast-E2,转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac E.coli感受态中,经半乳糖苷酶的蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-E2,然后将其转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-E2,E2基因会随着杆状病毒的增殖而获得表达。表达产物经直接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-Blot定性分析,在大约38 000处出现1条特异性的蛋白印迹与预期大小相符,表明BVDV E2基因在该系统中得到了表达。本研究为研制针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体及胶体金试纸条奠定了基础。
- 穆昱操时伟周玉龙李芹丁壮
- 关键词：E2杆状病毒表达系统SF9细胞
- 静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白在Bac-to-Bac系统中的表达、纯化与结晶被引量：1
- 2014年
- 表达、纯化静水椎螺(Lymnaea stagnalis)乙酰胆碱结合蛋白(Ls-AChBP)并得到晶体。将静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白cDNA序列克隆到表达载体pFastBac1上,构建了重组表达质粒pFastBac1-Ls-AChBP-His,经重组子筛选,得到重组杆状病毒质粒Bacmid,采用CellfectinⅡ脂质体,把带有外源基因的杆状病毒质粒Bacmid转染到昆虫细胞中,经镍柱和凝胶色谱柱对重组蛋白进行纯化得到五聚体,并用机器人进行结晶筛选获得其蛋白晶体。重组蛋白Ls-AChBP在Bac-to-Bac表达系统中得到高效表达并被纯化,结晶筛选得到晶体。
- 林波孟海玲吴勇邴晖长孙东亭罗素兰
- 关键词：纯化
- 基于Bac-to-Bac系统研究BmSPR基因在昆虫细胞的表达
- 墨蝶呤还原酶（SPR）是生物体内催化GTP分解代谢合成四氢生物蝶呤（BH4）最后一步反应的关键酶。对 SPR的研究主要集中在高等脊椎动物，在昆虫中的研究报道不多。我们的前期研究表明家蚕（Bombyx mori）的SPR基...
- 戴伟宏
- 关键词：生物信息学昆虫细胞遗传基因
- 文献传递
