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搜索到553篇“ 重组克隆“的相关文章

基于转化相关重组克隆曲酸合成基因簇及其在黑曲霉中的异源整合表达: 2024年; 【背景】黑曲霉(Aspergillus niger)是一种重要的丝状真菌底盘细胞,然而对其进行大片段DNA的遗传操作存在工具缺乏、效率低下的问题。海量基因组数据中存在大量未被鉴定的次级代谢产物合成基因簇,因相应DNA分子量大而难以克隆,大部分基因与产物分子之间的映射关系尚未被解析。【目的】开发一种适配黑曲霉的大片段DNA分子直接克隆的方法。以直接克隆米曲霉(Aspergillus oryzae)来源的曲酸合成基因簇(约30 kb)在黑曲霉底盘细胞中表达,实现曲酸的异源发酵。【方法】基于转化相关重组(transformation-associated recombination,TAR)克隆,构建适配黑曲霉转化的TAR捕获骨架载体pSEA-TAR;将曲酸合成基因簇上下游各1 kb同源DNA序列先后引入pSEA-TAR,中间以唯一的XhoⅠ相隔,得到曲酸合成基因簇捕获载体pSEA-KLR;随后,将NotⅠ/SbfⅠ消化后含有完整曲酸合成基因簇及上下游同源序列的米曲霉基因组与经XhoⅠ线性化的pSEA-KLR共同转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)VL6-48,通过营养缺陷筛选获得成功捕获曲酸合成基因簇的重组子,提取质粒,电转化大肠杆菌(Escherichia coli)扩增重组质粒;借助农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导黑曲霉转化,对获得的含有曲酸合成基因簇的黑曲霉转化子进行曲酸发酵,检测曲酸合成水平。【结果】获得了含有ARSH4/CEN6、TRP1、hph和LB/RB-T-DNA repeat的基于TAR克隆、适配黑曲霉表达的大片段DNA捕获载体pSEA-TAR。借助酿酒酵母高效的同源重组系统,通过同源重组获得含有曲酸合成基因簇的重组质粒pSEA-TAR-KA,捕获成功率为5.9%。对获得的含有曲酸合成基因簇的10株黑曲霉重组菌株KA1–KA10进行发酵分析发现均成功合成了曲酸,其中黑曲霉KA-2发酵7 d后曲酸水平最高,达到5.86 g/L。【结论】构建了适配黑曲霉的TAR克隆体系,用于大片段DNA高效捕获、重构和表达大型生物合成基因簇。以; 赵宇欣谭宇洋高莹朱柏松张明怡曹威; 关键词：黑曲霉

一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的感染性重组克隆方法: 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构建DH...; 陈瑞爱黄梅王楠楠李延鹏刘定祥叶俊贤罗琼杨小云董楠; 文献传递

广西CSFV E2基因遗传进化分析和表达CSFV E2基因的PRRSV重组克隆的构建与拯救: 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度致死性传染病,猪是该病的唯一天然宿主。传统猪瘟弱毒疫苗免疫效力好,但无法区分感染抗体和疫苗抗体。猪繁殖与呼吸综合征(porc...; 刘畅; 关键词：遗传变异分析 PRRSV

一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的感染性重组克隆方法: 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的感染性重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构...; 陈瑞爱黄梅王楠楠李延鹏刘定祥叶俊贤罗琼杨小云董楠; 文献传递

短肽重组克隆构建筛选的载体及其应用: 本发明涉及一种短肽重组克隆构建筛选的载体及其应用。具体地，本发明涉及一种用于构建和筛选短肽重组克隆的表达盒及含有该表达盒的载体，所述表达盒具有优化的Z1‑S1‑Z2‑S2‑Z3‑Z4式(I)所示结构。实验结果表明，本发明...; 徐万祥唐海平王健陈玲瀚连文博詹建民顾少华季朝能谢毅; 文献传递

温敏类弹性蛋白多肽的基因设计及重组克隆表达被引量：9: 2019年; 温敏类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides, ELPs)作为新型的药物载体,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。本研究根据大肠杆菌密码子的偏好性和简并性,将高度连续重复氨基酸的多种遗传密码引入基因序列中,利用依次插入单体基因和递归定向连接技术,成功构建了以缬氨酸为客座氨基酸的ELPs基因的表达质粒库,即p ET28-ELP-V_5～pET28-ELP-V_(50)。将pET28-V_(50)转化至表达宿主Escherichia coli BL21(DE3)中,经重组菌的培养和IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示ELP-V_(50)在大肠杆菌中成功获得了可溶性表达,与预期分子量大小一致。本研究为进一步构建不同分子量的ELPs基因库提供了新的思路,并为重组表达获得特定相变特性的多肽分子奠定了基础。; 任艳艳庄嘉楠荣娜孙薇杜伟立王珊珊; 关键词：基因设计克隆表达

小鼠TSC21基因敲除打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆的鉴定被引量：1: 2018年; 目的:构建小鼠TSC21基因敲除打靶载体,电转胚胎干细胞(ES细胞)并筛选同源重组阳性克隆。方法:订购含TSC21基因的129 BAC克隆,PCR扩增2对同源臂,利用PL253、PL452质粒进行目的片段的连接和同源重组,构建打靶载体并电转ES细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组阳性ES细胞克隆。结果:构建了TSC21基因敲除打靶载体,经过限制性内切酶鉴定及DNA测序鉴定,TSC21基因敲除打靶载体构建成功。Southern blot结果显示成功筛选到打靶序列同源重组阳性ES细胞克隆。结论:TSC21基因敲除打靶载体构建成功并筛选到同源重组阳性ES细胞克隆。; 殷正伟王朝亮张天标杨超张卫星; 关键词：基因敲除打靶载体同源重组小鼠

马立克氏病病毒感染性重组克隆系统及其构建方法和应用: 本发明公开了一种马立克氏病病毒感染性重组克隆系统及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述马立克氏病病毒感染性重组克隆系统包括多个粘粒，每个粘粒中克隆有马立克氏病病毒疫苗株基因片段，所述马立克氏病病毒疫苗株基因片段含有相...; 李凯王笑梅刘长军张艳萍高玉龙崔红玉高立; 文献传递

利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术制备HLA-A＊ 0201/HBc18-27单链三分子复合体: 2016年; 目的：构建和表达HLA-A＊0201/HBc18-27单链三分子复合体。方法：利用重叠延伸PCR将HBc18-27、（Gly4Ser）3、β2m、（Gly4Ser）4和HLA-A＊0201胞外区依次串联为单链三聚体（single-chain trimer,SCT）融合基因,通过同源重组克隆技术插入到pET28a原核表达载体,用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,采用金属螯合亲和层析法纯化目的蛋白,通过稀释复性法折叠成HLA-A＊0201/HBc18-27的复合单体,并生物素化,将单体包被到直径4.5μm的磁性微球,用构象特异性单抗（W6/32）进行荧光染色,流式细胞术分析其空间构象。结果：pET28a-HLA-A＊0201/HBc18-27基因序列和蛋白大小与预测一致;纯化后融合蛋白纯度约93%;流式细胞术分析显示pET28a-HLA-A＊0201/HBc18-27单体具有正确的空间构象。结论：利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术成功制备了HLA-A＊0201/HBc18-27的单链复合体,无需限制性内切酶和连接酶,发展了主要组织相容性单链复合体技术,有效简化了pMHCⅠ类分子的制备过程。; 许涛李晓娥吴优Khawar Ali Shahzad王伟张雷沈传来; 关键词：同源重组主要组织相容性复合体

马立克氏病病毒感染性重组克隆系统及其构建方法和应用: 本发明公开了一种马立克氏病病毒感染性重组克隆系统及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述马立克氏病病毒感染性重组克隆系统包括多个粘粒，每个粘粒中克隆有马立克氏病病毒疫苗株基因片段，所述马立克氏病病毒疫苗株基因片段含有相...; 李凯王笑梅刘长军张艳萍高玉龙崔红玉高立

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