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桑辛素对胶质瘤细胞株U87迁移与侵袭的影响
2024年
目的研究桑辛素在体外对人脑胶质细胞U87细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法利用细胞毒性及活性检测试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8)检测桑辛素对U87细胞增殖能力的影响;利用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测桑辛素对U87细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测桑辛素对U87细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinas,MMP-2)表达水平的影响。结果CCK-8检测结果显示,与0μg/mL的桑辛素相比,1、2、4、6μg/mL的桑辛素能够显著抑制U87细胞的增殖(P<0.001);划痕实验结果表明桑辛素浓度2、4、6μg/mL组迁移率分别为(20.597±1.225)%、(14.734±1.528)%和(7.811±1.496)%,显著低于0μg/mL组的(40.566±3.284)%(P<0.001);Transwell侵袭实验结果显示,桑辛素浓度2、4、6μg/mL组划痕愈合率分别为(85.000±6.557)、(41.000±6.245)和(13.333±3.215)个,显著低于0μg/mL组(116.667±14.572)(P<0.01);Western blot检测结果显示随着桑辛素浓度的增加,U87细胞中Vimentin的表达水平升高(P<0.001),而MMP-2的表达水平降低(P<0.001)。结论桑辛素能够有效抑制U87细胞的迁移和侵袭能力,其作用在一定的范围内与桑辛素的浓度呈正相关性。
唐冬高文宏张华平陈谦学
关键词:胶质母细胞瘤迁移
槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制研究
2024年
探讨槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制。方法 根据实验方式进行分组,分为对照组、槐定碱组、氯喹+槐定碱组。对槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭能力、迁移能力及活性氧蛋白水平激发情况进行分析,其中细胞增殖的抑制作用利用MTT法检测、侵袭能力利用Transwell小室法检测、细胞的迁移能力利用细胞划痕试验检、活性氧蛋白水平利用Western-blot法检测。结果 与对照组中的超微结构结构相比,U251恶性胶质瘤细胞株在经过槐定碱处理后,其胞质中出现大小不等的自噬体,而这部分自噬体中含有溶酶体、胞质等未消化的细胞器。MTT法检测发现在使用槐定碱试剂进行干预后,槐定碱组中槐定碱对U251恶性胶质瘤细胞生长的半数抑制浓度为(16.45±2.41),高于氯喹+槐定碱组的(2.67±0.56)及对照组的(1.01±0.03);通过Transwell小室检测细胞迁移率发现槐定碱组低于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);LC3Ⅱ/Ⅰ、活性氧水平分析中槐定碱组高于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);同时Person相关性分析提示活性氧与细胞中呈正相关性(r=0.431,P<0.05)。结论 通过分析发现,槐定碱能够通过调节、诱导自噬来抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭、迁移,并涉及细胞中活性氧水平的改变。
李深誉韦开亮吴修富申晓娟
关键词:槐定碱神经胶质细胞瘤增殖
MicroRNA-384在脑胶质瘤细胞株中的表达以及临床意义
2023年
目的:探究MicroRNA-384在脑胶质瘤细胞株中表达变化以及临床意义。方法:选取购买于中国科学院上海细胞生物所的低分级脑胶质瘤细胞株(3例)、高分级脑胶质瘤细胞株(5例)、正常脑组织细胞株(7例)为研究样本。采用体外瞬间转染法过表达或抑制U251细胞中MicroRNA-384,应用Transwell侵袭实验测定U251细胞系表达以及U251细胞系增殖以及侵袭能力的影响,应用实时荧光定量PCR技术(Q-PCR)测定U251中MicroRNA-384的含量、不同病理分级脑胶质瘤细胞株中MicroRNA-384表达水平变化情况。结果:脑胶质瘤细胞株中MicroRNA-384的含量明显低于胶质瘤组织旁正常细胞株的含量,差异有统计学有意义(t=3.418,P<0.05)。MicroRNA-384的含量随着脑胶质瘤病理分级的升高而降低,差异有统计学有意义(t=2.847,P<0.05)。与正常脑组织细胞株比较,转染MicroRNA-384组的U251细胞增殖抑制率更高,MicroRNA-384表达受到抑制,且随着培养时间延长其促进或抑制效果更明显,差异有统计学有意义(t=3.707、4.684、5.682、7.311、7.139,P<0.05)。结论:MicroRNA-384在脑胶质瘤中呈低表达,且随着病理分级程度的升高而降低,脑胶质瘤细胞株中MicroRNA-384表达受到抑制,随之培养时间延长其促进或抑制效果更明显,且不同时间MicroRNA-384组的U251细胞增殖抑制率高于正常细胞组,其含量的测定可评估脑胶质瘤分化程度,为临床靶向治疗提供新思路。
陈侠赖满香刘筱蔼来慧丽
关键词:脑胶质瘤细胞株
SOX5在胶质瘤组织中的表达及对胶质瘤细胞株U87生物学行为的影响
2023年
目的:探究SBY-BOX转录因子5(SOX5)基因在胶质瘤组织中的表达及对胶质瘤细胞株U87增殖活性和侵袭能力的影响。方法:胶质瘤和正常脑组织标本各取10例,采用实时定量荧光PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SOX5基因的表达,培养胶质瘤细胞株U87,将其分为对照组、无义序列组和siRNASOX5转染组。利用CCK8实验和Transell实验检测胶质瘤细胞株U87增殖活性及侵袭能力。利用Western印迹检测敲低SOX5表达后对基质金属蛋白酶(MMP-2)、MMP-9以及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达的影响。结果:与正常脑组织相比,胶质瘤组织中SOX5蛋白和mRNA水平均明显升高(t=23.38、18.36,均P<0.01)。siRNASOX5可有效敲低SOX5基因的表达,与对照组、无义序列组比较,siRNASOX5转染组SOX5蛋白和mRNA水平均明显降低(F=89.31、123.34,均P<0.01);CCK8实验结果显示,敲低SOX5表达后,胶质瘤细胞的增殖活性受抑制,第120小时胶质瘤细胞增殖活性仅为对照组的31.8%(F=553.62,P<0.05);Traswell实验结果显示,siRNA SOX5转染组穿过小室膜细胞数为9.22±0.91,与对照组(19.62±1.10)、无义序列组(18.56±1.21)相比明显降低,仅为对照组的46%(F=89.36,P<0.01)。与对照组和无义序列组相比,siRNA SOX5转染组MMP-2、MMP-9以及CyclinD1基因表达均明显下降(F=853.21、602.30、311.46,均P<0.01)。结论:SOX5在胶质瘤组织中表达异常升高,敲低SOX5表达后能明显抑制胶质瘤细胞的增殖活性和侵袭能力,SOX5在胶质瘤中可能通过调控MMP-2、MMP-9以及CyclinD1基因表达发挥促癌基因的作用。
钟天佑南阳王乐
关键词:U87细胞MMP-2CYCLIND1
常春藤皂苷元对人胶质瘤细胞株U251MG凋亡及迁移侵袭的影响及其机制
2023年
目的探讨常春藤皂苷元(Hederagenin)对人胶质瘤(Glioma)细胞株U251MG凋亡的影响和机制。方法应用不同剂量的Hederagenin作用于人胶质瘤细胞株U251MG 48 h后应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性。U251MG细胞分为实验组(给与80μg/ml Hederagenin干预)及对照组[给与无血清的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养液],流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)技术检测各组U251MG细胞凋亡及迁移侵袭相关蛋白的变化。多组数据间比较采用单因素方差分析,两组数据比较采用t检验。结果MTT结果显示,实验组U251MG细胞活性明显低于对照组,且随药物剂量增加效应更加明显(F=288.946,P<0.01)。流式细胞术(FCM)结果显示,Hederagenin作用于U251MG细胞48 h后实验组细胞凋亡率明显高于对照组[(21.07±4.85)%比(5.12±1.52)%,t=7.687,P<0.01],实验组细胞的迁移率明显低于对照组[(58.44±6.65)%比(80.26±6.86)%,t=-5.594,P<0.01),实验组细胞的跨膜细胞数明显少于对照组(63.33±7.69比115.83±9.35,t=-10.623,P<0.01)。Western blot结果显示,Hederagenin作用后实验组U251MG细胞凋亡相关蛋白Survivin、bcl-2表达明显低于对照组(0.767±0.067比1.091±0.174,0.800±0.086比1.149±0.165,t=-3.010、-3.249,P<0.05),而丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(RIPK1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8(cleave-Caspase-8)蛋白的表达明显高于对照组(1.121±0.134比0.380±0.037、0.604±0.067比0.417±0.043、1.310±0.185比0.823±0.124,t=9.233、4.068、3.787,P<0.05);侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达明显低于对照组(0.323±0.055比1.055±0.145、0.449±0.060比0.803±0.082、0.505±0.059比0.881±0.095,t=-8.176、-6.034、-5.824,P<0.01),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达明显高于对照组(0.681±0.056比0.418±0.050,t=6.068,P<0.01)。结论Hederage
郗艳国滕伟赵永辉程世翔董晓林梁赞王志峰李国京
关键词:胶质瘤常春藤皂苷元凋亡迁移
TrxR1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞株U87生物学特征的影响
2022年
目的探究硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)基因在脑胶质瘤组织中的表达情况以及对胶质瘤细胞株U87生物学特征的影响.方法回顾性分析中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库中325例脑胶质瘤患者的胶质瘤样本的转录组数据和临床资料,并利用蛋白质免疫印迹(WB)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫组织化学技术进一步检测TrxR1在正常脑组织及胶质瘤组织中的表达情况.组织标本取自于2010年9月至2018年11月于天津医科大学总医院神经外科行手术治疗的脑胶质瘤和自发性脑出血患者,其中胶质瘤组织标本12例和正常脑组织标本12例.培养胶质瘤细胞株U87,将其分为对照组、无义序列组和siRNA TrxR1转染组(每组n=3).采用RT-PCR、WB和免疫组织化学染色方法检测TrxR1基因的表达情况.采用MTT、Transwell及细胞成球实验检测胶质瘤细胞株U87的增殖活性、侵袭能力及胶质瘤细胞的致性.采用WB检测敲低TrxR1表达水平后对STAT3表达的影响,以及对STAT3信号通路下游基因表达的影响.结果对CGGA数据库分析显示,TrxR1 mRNA的表达水平随着胶质瘤病理级别的升高而升高(P<0.01),并且高表达组患者的总生存期低于低表达组(P=0.019).WB、RT-PCR和免疫组织化学检测显示,与正常脑组织比较,TrxR1在胶质瘤组织中的表达水平均明显升高(均P<0.01).siRNA TrxR1可有效敲低TrxR1基因的表达,与对照组、无义序列组比较,siRNA TrxR1转染组的TrxR1表达水平在蛋白和mRNA水平中均明显降低(均P<0.05).MTI检测结果显示,敲低TrxR1的表达后,胶质瘤细胞生长明显受到抑制,培养第4天的细胞增殖率仅为对照组的39.3%.Transwell实验结果显示,siRNA TrxR1转染组穿过小室膜的细胞数低于对照组和无义序列组(均P<0.01),仅为对照组的47.0%.细胞成球实验结果显示,与对照组、无义序列组比较,TrxR1 siRNA转染组的成球率均明显降低(均P<0.01).WB检测结果显示,与对照
王乐钟天佑南阳任炳成范志娟赵立文钟跃
关键词:神经胶质瘤肿瘤侵润信号转导和转录激活因子3
槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制研究
2021年
探讨槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株(U251 malignant glioma,U251MG)增殖和侵袭及机制。方法:将U251MG细胞分为对照组、槐定碱组和氯喹+槐定碱组,通过MTT法检测槐定碱对U251MG细胞生长的抑制作用,并采用透射电子显微镜观察细胞超微结构,荧光染色观察U251MG细胞形态,Western-blot法检测LC3Ⅰ和Ⅱ蛋白,通过Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,细胞划痕试验检测细胞的迁移能力,Western-blot法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)蛋白水平。结果槐定碱组对U251MG细胞生长的半数抑制浓度(IC50)明显高于对照组和氯喹+槐定碱组(P<0.05)。与对照组比较,U251MG细胞经槐定碱处理24h后胞质内出现大小不等的自噬体,其内包含部分胞质成分和未消化的细胞器。Transwell小室检测结果显示,槐定碱组细胞侵袭数量明显低于对照组和氯喹+槐定碱组(P<0.05)。槐定碱组细胞迁移率明显低于对照组和氯喹+槐定碱组(P<0.05)。槐定碱组LC3Ⅱ/Ⅰ、ROS水平均高于对照组和氯喹+槐定碱组(P<0.05)。Person相关性分析发现,LC3Ⅱ/Ⅰ与ROS呈正相关(r=0.431,P<0.05)。结论:本研究中槐定碱可以诱导自噬以抑制U251MG细胞增殖和侵袭,且涉及细胞内ROS水平的改变。
刁劲夫
关键词:槐定碱神经胶质细胞瘤增殖
原儿茶酸对人胶质瘤细胞株U251MG增殖、凋亡的影响及其机制被引量:4
2021年
目的探讨原儿茶酸(PCA)对人胶质瘤细胞株U251MG增殖、凋亡的影响及相关分子机制。方法常规培养人胶质瘤细胞株U251MG。应用噻唑蓝(MTT)技术检测0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L浓度PCA干预后各组细胞的活性。流式细胞术(FCM)检测PCA对U251MG细胞周期和凋亡的影响。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测U251MG在药物干预前后增殖凋亡相关基因和的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的变化,组间比较采用t检验。结果0μmol/L的PCA干预48 h后细胞活性为0.881±0.079、2.5μmol/L为0.757±0.077、5.0μmol/L为0.600±0.101、10.0μmol/L为0.532±0.056(F=35.131,P<0.01),差异有统计学意义。RT-qPCR和Western blot结果显示,随PCA浓度增加,增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达水平为1.172±0.153、0.756±0.059、0.601±0.061、0.390±0.059、0.236±0.036(F=55.618,P<0.01),差异有统计学意义;蛋白的表达水平分别为0.934±0.071、0.781±0.053、0.650±0.045、0.384±0.046、0.174±0.019(F=113.681,P<0.01),差异有统计学意义。FCM结果显示,PCA组U251MG细胞的G0/G1期比例[(71.033±8.570)%]高于对照组[(52.057±6.735)%,t=3.015,P<0.05],差异有统计学意义,G2/M比例[(18.833±7.639)%]低于对照组[(36.910±5.328)%,t=-3.362,P<0.05],差异有统计学意义;Western blot结果显示,增殖相关蛋白Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E表达在PCA组低于对照组(0.405±0.047比1.217±0.101、0.673±0.070比1.166±0.110、0.604±0.085比1.286±0.085,t=-12.625、-6.549、-9.827,P<0.01),而p21、p27表达在PCA组高于对照组(1.206±0.096比0.575±0.046、0.990±0.086比0.481±0.045,t=10.267、9.083,P<0.01)。FCM结果显示,PCA组U251MG细胞凋亡率(29.971±7.572)%高于对照组[(10.264±3.121)%,t=4.168,P<0.05];Western blot结果显示,凋亡相关蛋白bcl-2、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9表达在PCA组低于对照组(0.337±0.024比1.198±0.113、0.430±0.044比1.150±0.098、0.486±0.049比1.278±0.107,t=-12.9
李宝龙杨大为刘阳李玉斌王同立马智慧张海珢张龙杨松海
关键词:胶质瘤原儿茶酸增殖凋亡信号通路
TSA联合HSV-1对C6鼠胶质瘤细胞株细胞增殖、细胞凋亡的影响
2020年
目的探讨曲古抑菌素A(TSA)联合Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)对C6鼠胶质瘤细胞株细胞增殖、细胞凋亡的影响。方法体外培养C6胶质瘤细胞,设对照组(加入等体积培养基)、TSA组(加入0.5×10^-3μmol/L TSA处理)、HSV-1(加入10 MOI HSV-1处理)及TSA+HSV-1组(加入0.5×10^-3μmol/L TSA和10 MOI HSV-1处理)共4组,每组设5个复孔。CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR、免疫印迹法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达水平。结果作用48、72 h,与对照组相比,TSA组、HSV-1组、TSA+HSV-1组C6细胞增殖活性显著降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增高(P<0.05),VEGF mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);而且,TSA+HSV-1组明显优于TSA组和HSV-1组(P<0.05)。结论TSA联合HSV-1对体外培养的C6细胞可产生协同或叠加杀伤作用,抑制VEGF表达可能是作用机制之一。
许强华陈新军刘平非谢腾陈晓巍陈治军
关键词:胶质瘤C6胶质瘤细胞细胞增殖细胞凋亡曲古抑菌素A
替莫唑胺耐药胶质瘤细胞株的构建及榄香烯逆转其耐药性的研究被引量:4
2020年
目的建立对替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药的胶质瘤细胞株,探讨榄香烯(Elemene,Ele)对该类耐药细胞株耐药的逆转作用。方法使用TMZ对U251、H4、MO59J、SW1188细胞株于体外进行逐步递增浓度诱导,构建对TMZ耐药的细胞株,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)及耐药指数(resistace factor,RF)。对各耐药细胞株,分别使用Ele及Ele联合TMZ进行处理,使用流式细胞仪检测细胞周期变化。对各耐药细胞株,使用Ele联合不同浓度TMZ进行处理,MTT法计算联合用药的两药相互作用系数(CDI)。结果成功构建U251、H4、MO59J、SW1188的耐药细胞株,MTT法检测TMZ对各耐药的IC50较相应亲本显著上升,差异均有统计学意义(均P<0.01),RF分别是8.1,9.2,9.8,8.7。对各耐药,联合用药处理组,G1期细胞较单用TMZ组明显减少,G2期细胞增多,两药联合的相互作用性质为协同。结论TMZ分步诱导法可制备胶质瘤耐药细胞株,Ele可能通过诱导细胞G2/M期阻滞而逆转胶质瘤耐药细胞株对TMZ的耐药性。
赵海林王璐璐罗冬冬胡骕李丹彭彪
关键词:替莫唑胺胶质瘤细胞株榄香烯逆转

相关作者

周幽心
作品数:295被引量:1,136H指数:16
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陈忠平
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陈芙蓉
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供职机构:中山大学肿瘤防治中心
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谢学顺
作品数:44被引量:62H指数:4
供职机构:苏州大学
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