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恶性疟原虫海南株var2csa基因的克隆、表达及免疫识别研究: 2011年; 目的克隆、表达恶性疟原虫海南株HN(2)var2csa基因DBL4、DBL5、DBL6区,通过ELISA方法比较其与硫酸软骨素A(CSA)的亲和能力差异,以及人体对恶性疟原虫海南株HN(1)、(2)VAR2CSA不同DBL区的免疫应答差异。方法根据DBL区序列设计3对引物,PCR扩增目的片段,并与pMD18-T克隆载体连接。经PCR、酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b,通过转化、诱导、纯化表达重组蛋白质,SDS-PAGE和Western blot检测。通过ELISA方法进行重组蛋白质与CSA的粘附实验以及与患者血清的免疫识别实验。结果酶切及DNA测序结果均表明表达载体构建成功,表达并纯化3个DBL区重组蛋白质,分子量与预计大小相同,Western blott检测目的蛋白质具有免疫反应性,ELISA显示不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其它两个DBL区有更高的OD405值,并且DBL5区被妊娠相关疟疾病人血清识别水平显著高。结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白质表达成功,DBL5区与CSA的粘附能力较强,人体对DBL5区的免疫应答反应可能在抗病免疫过程中起到关键作用。; 康巍彭帅陆慧君尹继刚陈启军姜宁; 关键词：恶性疟原虫 DBL 硫酸软骨素A

恶性疟原虫海南株var2csa基因DBL区蛋白的原核表达及功能分析被引量：1: 2011年; 目的克隆、表达恶性疟原虫海南株变异抗原基因(var)家族之一var2csa基因的血型抗原结合基团(duffy anti-gen-binding ligand,DBL)4、DBL5、DBL6区,比较其与硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A,CSA)黏附能力的差异。方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株基因组DNA中3个目的片段,将扩增产物与pMD18-T克隆载体连接,经酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,并用组氨酸标签融合蛋白纯化柱(His GraciTrap)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)检测目的蛋白。ELISA检测不同DBL区重组蛋白与CSA的结合情况。结果 PCR扩增获得目的片段分别为996、859和894bp,酶切及DNA测序结果均显示重组质粒构建成功,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达并纯化3个DBL区重组蛋白,DBL4区、DBL5区和DBL6区的相对分子质量分别为Mr 439800,Mr 34500,Mr 36000。West-ern blotting检测结果显示,目的蛋白具有反应原性。ELISA结果显示,不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其他两个DBL区的吸光度(A405值)高(P<0.05),表明DBL5区与CSA的黏附能力较强。结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白表达成功,DBL5区与CSA的黏附能力较强。; 康巍常志广陆慧君姜宁尹继刚陈启军; 关键词：恶性疟原虫 DBL 硫酸软骨素A

恶性疟原虫海南株子孢子期SSU rRNA编码基因的克隆及序列分析: 2010年; 目的克隆恶性疟原虫海南株子孢子期小亚基核糖体核糖核酸（SSUrRNA）编码基因片段，分析其序列特征。方法根据恶性疟原虫基因库相关核酸序列设计1对引物，采用PCR方法从海南恶性疟患者血样核酸提取物中扩增出恶性疟原虫SSUrRNA基因片段，纯化后与pGEM-Teasy质粒连接，构建重组子并转化大肠杆菌JM109；阳性克隆经双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列，采用BLAST软件分析其特征。结果恶性疟原虫子孢子期SSUrRNA基因扩增片段大小约为347bp；阳性克隆重组质粒双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段；核酸序列测定显示插入的SSUrRNA基因扩增片段含有347个核苷酸，与GenBank中的恶性疟原虫3D7株相同序列进行比对，其同源性为100％，而与7G8株的同源性则为98．0％，其中第153位碱基发生了缺失，第184位碱基由C取代了T，而第188位T碱基与第189位A碱基为插入碱基，第243位碱基则由T取代了c。结论成功克隆恶性疟原虫海南株孢子期SSUrRNA编码基因序列，该序列相对保守，不同地理株间存在单核苷酸多态性。; 高世同张仁利黄达娜黄晓燕耿艺介吴少庭; 关键词：恶性疟原虫 SSU

恶性疟原虫海南株var基因的序列测定及分析: 疟疾是一种流行广泛,对人类危害最为严重的重要传染病之一。随着蚊虫对杀虫剂及疟原虫对各种治疗药物的抗性的不断增加,且缺乏有效地预防疫苗,防治形势一直很严峻。疟原虫复杂的形态特征变化和不断地抗原变异能力是抗疟疾疫苗研制的巨大...; 李萌; 关键词：恶性疟原虫 CSA; 文献传递

恶性疟原虫海南株翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因在M15中的表达: 2007年; 获得翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因后与表达载体pQE-30重组,然后转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导后表达TCTP融合蛋白,薄层扫描结果显示目的蛋白占菌体总蛋白的23.4%,目的蛋白中可溶性蛋白所占比例高于非溶性蛋白。Ni-NTA纯化后C端测序,结果C端13个氨基酸序列与由GenBank国际基因库中恶性疟原虫TCTP基因推导出的C端13个氨基酸序列及组成完全一致。结果表明成功地在M15中表达了恶性疟原虫海南株TCTP基因,为进一步研究提供了实验材料。; 傅作申陈知航张娟花艳红程远国; 关键词：恶性疟原虫克隆原核表达

恶性疟原虫海南株氯喹抗性相关基因多态性及msp3等位基因分型研究: 疟疾广泛流行至今仍无法得到很好控制的原因主要有以下几点：出现抗药性虫株和对杀虫剂产生抗性的媒介蚊虫，缺乏适当有效的疟疾疫苗等。疟疾流行导致大量人口死亡，能够引发严重的社会经济问题，几乎成为所有热带和亚热带国家的沉重负担。...; 于丹; 关键词：恶性疟原虫氯喹抗性基因分型; 文献传递

恶性疟原虫海南株翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因在M15中的表达: 获得翻译控制肿瘸蛋白(TCTP)基因后与表达载体pQE—30重组,然后转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导后表达TCTP融合蛋白,薄层扫描结果显示目的蛋白占菌体总蛋白的23.4%,目的蛋白中可溶性蛋白所占比例高于非溶性蛋白...; 傅作申陈知航张娟花艳红程远国; 关键词：恶性疟原虫克隆; 文献传递

恶性疟原虫海南株FEN-1基因的克隆及序列分析: 2005年; 　目的　克隆并测定恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)侧翼核酸内切酶 1(FEN 1)基因序列,比较 FCC1/HN株与国外分离株FEN 1基因序列的差异。　方法　根据 FEN 1 基因已知序列设计合成 1 对引物,应用 PCR技术从 FCC1/HN株基因组DNA中扩增出FEN 1基因,构建重组质粒PMD18 T FEN 1。阳性克隆的重组质粒经酶切鉴定后进行测序。应用DNAMAN分析软件进行不同分离株FEN 1基因序列的同源性比较。　结果　PCR扩增得到特异的 FCC1/HN株FEN 1基因序列,基因全长1 947 bp,A+T含量为56%,G+C含量为44%。酶切鉴定获得了正确的PMD18 T FEN 1重组质粒。测序表明,恶性疟原虫FCC1/HN株与国外Gambia株和3D7株的FEN 1基因序列有较高的同源性。结论　成功克隆恶性疟原虫FCC1/HN株FEN 1基因。序列测定及同源性分析表明,恶性疟原虫FCC1/HN株与国外已报道各株的FEN 1基因序列有高度同源性。; 王萍吴娴波李明; 关键词：基因序列

恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)EBA-175Ⅱ区F2结构域基因的克隆与表达被引量：1: 2005年; 目的构建EBA-175Ⅱ区F2结构域基因的原核表达载体。方法采用PCR的方法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出EBA-175Ⅱ区F2结构域856～1848bp基因,定向克隆入PMD18-T质粒,再经BamHⅠ和XhoⅠ酶切亚克隆入高效表达载体pET23a(+)。重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在BL21(DE3)菌株中进行IPTG诱导表达。结果重组质粒经序列测定证实插入基因为目的基因,符合表达框架,经IPTG诱导,在BL21(DE3)菌株中以非融合蛋白形式表达,SDS-PAGE电泳显示在约36.4kDa处可见明显蛋白增粗条带,与预期结果一致。结论成功构建了重组EBA-175Ⅱ区F2结构域基因表达载体,并在BL21(DE3)中有效表达。; 孙晓敏郝文波王萍李明贾钰华; 关键词：恶性疟原虫分子克隆

恶性疟原虫海南株PNP基因的克隆、表达及功能初步研究: 疟原虫没有从头合成嘌呤的途径,依靠补救合成途径以利用现成嘌呤碱或嘌呤核苷.为满足红细胞内期疟原虫大量裂体增殖,嘌呤补救合成十分活跃.参与嘌呤补救合成的酶有腺苷脱氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)等,其中PNP是关键酶.该研...; 李宝华; 关键词：恶性疟原虫克隆纯化; 文献传递

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