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HSV-1即刻早期基因的5′UTR对报告基因mRNA翻译的影响
2024年
mRNA疫苗的5′非翻译区(5’untranslated regions,5′UTR)对其表达起着重要作用,报告基因增强绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)用于检测5′UTR调控mRNA表达已经是一个较为成熟的实验方法.为研究单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)即刻早期基因的5′UTR作为报告基因EGFP mRNA的5′UTR对其翻译的影响,本研究将4个即刻早期基因的5’UTR以及表达能力较强的人β珠蛋白基因(humanβGlobin,hBg)5′UTR插入报告基因EGFP 5’端,通过观察绿色荧光强度研究不同即刻早期基因5′UTR对mRNA翻译的影响.结果表明:经mRNA转染试剂和纳米脂质体颗粒分别递送进293T细胞和小鼠体内;RL2的5′UTR作为报告基因EGFP 5′UTR的表达水平与hBg 5′UTR相近,RS1、US1、US12表达水平明显弱于hBg 5′UTR.因此,RL2基因的5′UTR有潜力作为mRNA疫苗的5′UTR.
徐朗希李丹丹李恒郑惠文彭沙沙彭沙沙张莹廖芸廖芸刘龙丁
关键词:单纯疱疹病毒1型蛋白表达水平
骨肉瘤患者癌组织中AHA1 mRNA和LOXL2 mRNA表达与侵袭转移基因mRNA表达的相关性及临床意义
2024年
目的研究骨肉瘤(osteosarcoma)患者癌组织中热休克蛋白90 ATP酶激活因子1(the activator of HSP90 ATPase-1,AHA1)和赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase like-2 protein,LOXL2)表达与侵袭转移基因mRNA表达的相关性及临床意义。方法选取2016年2月~2017年3月华北医疗健康集团峰峰总医院诊治的90例骨肉瘤患者为研究对象。应用实时荧光定量PCR检测组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA及侵袭转移基因Wnt家族成员9A(Wnt9a)mRNA,锌指E盒结合同源盒1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA,锌指E盒结合同源盒2(ZEB2)mRNA,N-钙黏素(N-cad)mRNA和波形蛋白(Vim)mRNA表达。采用Pearson相关分析,比较不同临床特征骨肉瘤患者AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达差异。Kaplan-Meier生存分析影响AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达对骨肉瘤患者预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响骨肉瘤患者预后的因素。结果骨肉瘤组织中AHA1 mRNA(3.16±0.59),LOXL2 mRNA(2.84±0.44)及侵袭转移基因Wnt9a mRNA(3.23±0.42),ZEB1 mRNA(2.73±0.39),ZEB2 mRNA(2.52±0.56),N-cad mRNA(2.71±0.65),Vim mRNA(2.81±0.73)表达均高于癌旁组织(1.10±0.21,0.95±0.18,0.79±0.15,0.64±0.11,0.98±0.19,0.68±0.14,0.72±0.15),差异具有统计学意义(t=31.206,37.716,51.903,48.931,24.706,28.964,26.605,均P<0.05)。骨肉瘤组织中AHA1 mRNA与LOXL2 mRNA表达呈显著正相关(r=0.712,P<0.05)。骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA与侵袭转移基因Wnt9a mRNA,ZEB1 mRNA,ZEB2 mRNA,N-cad mRNA,Vim mRNA表达呈显著正相关(r=0.504~0.720,均P<0.05)。Eneeking分期Ⅲ期、有软组织浸润和有肺转移骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达高于Eneeking分期Ⅰ~Ⅱ期、无软组织浸润和无肺转移患者,差异具有统计学意义(t=14.122~171.054,均P<0.05)。AHA1 mRNA高表达组和低表达组患者五年生存率分别为36.36%(16/44),78.26%(36/46)。AHA1 mRNA高表达组患者五年累积生存率明显低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=16.081,P<0.05)。LOXL2 mRNA高表达组
沈家亮王琳尚文强
关键词:骨肉瘤肿瘤侵袭转移
一种对BRAF基因V600E突变基因mRNA的编辑技术及用于肿瘤基因治疗
本发明涉及基因治疗与细胞治疗之技术和药物候选物。是人BRAF基因600位错义突变缬氨酸变为酪氨酸后肿瘤细胞自激活、导致临床难治、容易复发、容易转移的消减治疗方法技术。细胞内源腺苷脱氨酶ADAR能将其结合mRNA处未配对腺...
毛建平
一种用于评价食蟹猴脂肪组织中FABP4基因mRNA表达的qPCR检测方法
本发明涉及基因检测技术领域,特别是涉及一种用于评价食蟹猴脂肪组织中FABP4基因mRNA表达的qPCR检测方法。本发明提供的引物组可实现食蟹猴FABP4基因及内参基因GAPDH的特异性扩增,对样本中的非目的基因没有扩增信...
王陈芸唐东红叶尤松龙维虎李哲丽李咏洁张桃苹范胜涛黄璋琼江勤芳杨万静杨汝佳
心房颤动合并脑栓塞患者离子通道蛋白质电泳基因mRNA组学改变及其意义
2024年
目的探究心房颤动合并脑栓塞患者离子通道蛋白质电泳基因mRNA组学改变及其意义。方法将2023年1月—2023年12月徐州医科大学附属邳州医院收治的40例心房颤动合并脑栓塞患者纳入研究组,选择同期20名健康体检者纳入对照组。分别收集患者干预前、后外周静脉血(常规化验后剩余血),对血液标本进行基因组miRNA表达谱微阵列分析,过程中使用mRNA芯片处理,利用实时定量PCR针对血液主要离子通道基因mRNA进行有效验证。结果利用靶基因筛选,干预前改变超过1.5倍、干预后改变超过10倍调控离子通道蛋白的miRNAs主要有20种,其中包括miR1266、miR-377-5p、miR-1284、miR-4796-5p、miR-296-3。干预前增加超过1.5倍、干预后下调超过10倍、干预后上调30倍指标包括miR-146b-5p、miR-151a-3p、miR-98-5p、miR-199a-3p、miR-224-5p、miR-199b-3p、miR-152;SCN5A、CACNAlC、KCNA5、KCNH2、KCNEl、KCNN3调控miRNAs表达,分别对Na^(+)、Ca^(2+)、K^(+)、复极期Ikr电流、复极期Iks电流、Ca^(2+)、激活K^(+)存在影响,且靶基因预测其调控基因较多;利用实时荧光定量PCR,对调控离子通道蛋白表达情况进行验证,发现干预3个月后和干预前的差异和芯片结果具有一致性。结论心房颤动合并脑栓塞调控离子通道蛋白数量较多,其中SCN5A、CACNAlC、KCNA5、KCNH2、KCNEl、KCNN3蛋白基因对Na^(+)、Ca^(2+)、K^(+)存在影响,为今后疾病治疗研究奠定基础。
李飞胡永杰
关键词:心房颤动脑栓塞
同时检测梅毒螺旋体tp47和polA双基因mRNA一步法PCR试剂
同时检测梅毒螺旋体tp47和polA双基因mRNA一步法PCR试剂,属于分子医学技术领域。提供一种用于同时检测梅毒螺旋体tp47和polA双基因mRNA引物探针组合物。提供各类标本(含人体或环境的标本)的梅毒螺旋体tp4...
林丽蓉郑欣琪童曼莉庄江兴刘莉莉杨天赐
笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响被引量:1
2024年
本试验旨在探讨笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响。选用21日龄黄脚麻鸡720只,3层层叠式笼内饲喂,鸡笼规格为长×宽×高=1.2 m×0.8 m×0.4 m,公鸡和母鸡分开饲养,均随机分为4组(每组5个重复),笼养密度分别为15(低密度组)、17(中密度组)、19(中高密度组)和21只/m 2(高密度组)。试验期42 d。结果表明:1)对于公鸡,21~42日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05);43~63日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组和高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。对于母鸡,21~42日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组(P<0.05),高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05);43~63日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。2)对于公鸡,低密度组肝脏重量显著低于其他各组(P<0.05),肝脏指数显著低于高密度组(P<0.05)。3)对于母鸡,中密度组血清超氧化物歧化酶活性显著高于高密度组(P<0.05),中高密度组血清丙二醛含量显著高于高密度组(P<0.05)。4)对于公鸡,中密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05)。对于母鸡,高密度组十二指肠隐窝深度显著高于中高密度组(P<0.05),中高密度组十二指肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05);高密度组空肠绒毛高度显著低于中密度组和中高密度组(P<0.05),高密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著低于低密度组(P<0.05);高密度组回肠隐窝深度显著高于其他各组(P<0.05)。5)对于公鸡,中高密度组空肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA相对表达量显著高于其他各组(P<0.05)。对于母鸡,中高密度组空肠核因子E2相�
姬改革巨晓军单艳菊章明邹剑敏屠云洁刘一帆束婧婷庞立川范晨宇
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甘露糖修饰脂质体包装ASFV CP204L基因mRNA在小鼠体内的免疫反应评估
非洲猪瘟(African Swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染猪引起的一种急性、热性、高度接触性的动物传染病,给世界养猪业造成了巨大的经济损...
龚乐乐
关键词:非洲猪瘟病毒免疫小鼠
淡豆豉中产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗作用和毒素合成关键基因mRNA表达的影响
2024年
目的考察从淡豆豉Sojae Semen Praeparatum(SSP)炮制过程中分离的15株产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出具有抑制产毒黄曲霉菌生长和降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的高效拮抗菌,探究高效拮抗菌发酵产物对黄曲霉毒素(aflatoxins)合成关键基因mRNA表达量的影响。方法运用平板对峙法与十字交叉法检测15株产γ-氨基丁酸微生物及其发酵产物对产毒黄曲霉标准株(简称:产毒标准株)生长的影响,超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测15株菌对AFB1的降解效果,考察其对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出高效拮抗菌;针对高效拮抗菌发酵产物分别运用菌丝干重法检测其对产毒标准株菌丝生长的影响,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测其对黄曲霉毒素合成关键基因(aflR、aflD、aflM、aflP)mRNA表达的影响。结果15株菌及其发酵产物对产毒标准株的生长抑制率分别在15.88%~56.05%和25.74%~52.12%,对AFB1降解率在2.74%~57.87%,表明它们对产毒黄曲霉菌均有一定的拮抗作用,并筛选出具有高效拮抗作用的黑曲霉菌Aspergillus niger(JC2)和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(Xd1)。当高效拮抗菌发酵产物加入量为2000µL时,JC2和Xd1对产毒标准株菌丝生长的抑制率分别为73.82%和63.34%,且能明显抑制黄曲霉毒素合成关键基因aflR、aflD、aflM、aflP的mRNA表达。结论淡豆豉炮制中存在既能产γ-氨基丁酸又能明显抑制产毒标准株生长和产毒的拮抗菌,其拮抗作用可能通过抑制产毒标准株菌丝生长和毒素合成关键基因的mRNA表达。
戴家齐贺婧朱晓蓝王立元龙凯周立分杨安金翁美芝谢小梅
关键词:淡豆豉Γ-氨基丁酸拮抗作用
H7N9亚型禽流感病毒HA基因mRNA的构建
2023年
H7N9亚型禽流感病毒(AIV)持续给家禽及人类健康造成威胁。为构建H7N9亚型AIV(简称H7N9 AIV)mRNA疫苗,本研究以AIV分离株A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)(简称CK/YN/SD024/2021)的HA基因为目的基因、选择来自人β-球蛋白和非洲爪蟾β-球蛋白的不同编码基因序列作为HA基因的非翻译区(UTR),构建了中间转录质粒pGEM-YN和pXT7-YN,以2个质粒为模板通过体外转录制备了mRNA mH7-YN-pGEM和mH7-YN-pXT7;将2种mRNA转染HEK293T细胞,western blot鉴定结果显示2种mRNA转染的细胞均可检测到约为70 ku的HA蛋白条带和50 ku的HA1蛋白条带;通过间接免疫荧光试验(IFA)确定最适转染剂量和HEK293T细胞中HA蛋白的动态表达,结果显示,3μg mRNA转染106个细胞并于转染24 h后荧光信号强度均最强;将2种mRNA转染鸡胚成纤维细胞(CEF),均可通过IFA检测到HA蛋白的表达。以上结果表明,本研究正确构建了2种含H7N9 AIV HA基因的mRNA,且其均能够在HEK293T细胞和CEF中正确表达HA蛋白,3μg mRNA转染HEK293T细胞可获得最佳的蛋白表达水平,转染24 h后HA蛋白的表达水平达到最高。本研究基于UTR序列的差异首次正确构建了两种能在哺乳动物细胞和禽类细胞中高效表达H7N9 AIV HA蛋白的mRNA,为禽流感mRNA疫苗的研发和免疫效力评估奠定了良好的物质和技术基础。
杨佳欣刘文宇李炯颉陈普成柳金雄陈化兰姜永萍
关键词:禽流感病毒MRNAUTRHA基因

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徐日福
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