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一种哺乳细胞贴壁培养的中空管束式固定床生物反应器: 本发明提供了一种哺乳细胞贴壁培养的中空管束式固定床生物反应器，其能有效解决现有固定床生物反应器使用过程中，细胞在载体上分布不均匀、载体堆叠的中心容易产生无细胞的“死区”、反应器内流体介质剪切力大、细胞难以收获的技术问题。...; 白仲虎聂简琪郭永信李康孙杨; 文献传递

一种多肽及其作为细菌或哺乳细胞转染载体的应用: 本发明涉及一种多肽及其作为细菌或哺乳细胞转染载体的应用。所涉及的多肽的结构如式(1)所示。本发明的转染体系，能够转染多种类型小核酸分子，分枝状肽与小核酸分子以非共价方式结合形成纳米粒，纳米粒制备简单；本发明的多肽不仅适用...; 薛小燕陈周罗晓星胡玥周颖侯征李明凯孟静茹; 文献传递

一株针对人EGFR的单链抗体克隆与哺乳细胞表达被引量：1: 2018年; 目的：制备特异性抗人表皮生长因子受体（EGFR）的单链抗体（sc Fv）,鉴定其生物学活性,为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法：从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA,利用5’RACE技术扩增轻链和重链可变区（VL、VH）基因,构建具有VL、VH基因的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性;Fortebio检测抗原抗体间的亲和力,流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果：获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH,成功构建EGFR-sc Fv,特异性与天然EGFR蛋白结合,亲和力达3.22×10-9mol/L。结论：成功构建了抗人EGFR单链抗体,为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础。; 高鑫韦攀健闫卓红易玲王小珏杨斌张洪涛; 关键词：表皮生长因子受体单链抗体

基于核酶开关的哺乳细胞内硫胺素焦磷酸荧光生物传感器的建立被引量：2: 2017年; 硫胺素焦磷酸(Thiamine pyrophosphate,TPP)是维生素B1在细胞内的主要活性形式,也是糖、脂肪酸和氨基酸氧化代谢中重要的辅助因子。在细胞内,利用TPP适配体与天然核酶组装成的人工核酶开关调节靶基因表达,目前仅局限于原核、真菌或植物细胞。本实验将原核生物中筛选的"Switch-on"与"Switchoff"的两种类型的TPP核酶开关,运用重叠延伸PCR的方法构建于增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的3'非翻译区(UTR),转染人胚肾上皮细胞(HEK293),通过荧光显微镜和流式细胞仪分析,观察了不同浓度TPP对EGFP表达能力的调控。结果表明,构建的两种"Switch-on"和一种"Switch-off"核酶开关均表现出明显的TPP浓度依赖性,且具有良好的特异性,在150μmol/L TPP时分别将EGFP的荧光强度提高3.1倍、1.9倍和降低2.3倍。这种构建通过TPP与核酶开关中其适配体的特异性作用直接将TPP浓度的变化转化为报告基因表达的改变,利于通过荧光检测方法实现对哺乳活细胞内代谢物或因子的无标记、无损伤、可视、高效的检测。; 张媛媛程慧孙艳王金娥吴正岩裴仁军; 关键词：基因表达调控哺乳细胞

人自分泌运动因子哺乳细胞表达纯化及酶学特性被引量：1: 2017年; [目的]利用哺乳细胞表达系统表达人ATX蛋白,并对其进行纯化、酶学性质分析。[方法]以pFastBacTMHTAATX质粒为模板,PCR扩增ATX基因,并连接至质粒pInsulator-8His,构建真核表达质粒pInsulator-ATX-8His,经双酶切鉴定后,并瞬时转染至HEK293F细胞,SDS-PAGE检测ATX的表达。通过Ni柱和凝胶层析两步法纯化ATX,HPLC鉴定ATX蛋白的纯度。利用Bis-pNPP底物检测纯化ATX的活性及酶学性质。[结果]真核表达质粒pInsulator-ATX-8His构建成功,并在HEK293F细胞中成功表达,经纯化后ATX蛋白纯度达到98%,并且纯化的ATX具有磷酸二酯酶的活性。酶学性质分析,该酶反应最适pH值为9.0,在0~50℃有较好的热稳定性,金属螯合剂EDTA可抑制ATX活性,金属离子Ca^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)促进ATX的活性。[结论]实现了人ATX在哺乳细胞中的表达,获得了高纯度的ATX蛋白,完成了ATX酶学性质的分析。; 赵亚蕊曹鹏程郑耀武张全爱赵峰梅渠志灿赵邑; 关键词：自分泌运动因子哺乳细胞纯化酶学特性

一种多肽及其作为细菌或哺乳细胞转染载体的应用: 本发明涉及一种多肽及其作为细菌或哺乳细胞转染载体的应用。所涉及的多肽的结构如式(1)所示。本发明的转染体系，能够转染多种类型小核酸分子，分枝状肽与小核酸分子以非共价方式结合形成纳米粒，纳米粒制备简单；本发明的多肽不仅适用...; 薛小燕陈周罗晓星胡玥周颖侯征李明凯孟静茹

抗人CD45抗体哺乳细胞表达载体的构建、表达与鉴定: 【目的】　　构建两种新型抗人CD45哺乳动物细胞表达表达载体，利用DHFR系统筛选出能稳定高表达抗CD45基因工程抗体的细胞株，为以人CD45为靶点的研究奠定基础。　　【方法】　　（1）PCR扩增得到抗CD45抗体的轻链...; 尹旺春; 关键词：哺乳细胞基因工程动物模型

规模化哺乳细胞培养技术生产病毒疫苗——过程工程和生物反应器被引量：6: 2015年; 生物过程工程开发策略与技术手段,以及生物反应器技术在过去的20年内伴随着生物医药产业的快速腾飞,以日新月异的速度发展起来,成为当今生物技术产业化开发中的核心支撑技术,也是生物医药生产过程中决定产品质量与成本的重要因素。以规模化哺乳细胞培养生产病毒疫苗为例,; 杨艳坤郭雯雯隋涌白仲虎; 关键词：生物反应器细胞培养技术病毒疫苗生物过程疫苗生产

ARM结构的缺失对SPAG6在哺乳细胞中定位的影响: 2015年; 目的：本研究构建精子相关抗原6（SPAG6）基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM，并使其在CHO细胞中表达，观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。方法利用NCBI数据库，寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区，分析全长蛋白序列，检索出SPAG6有7个ARM区域。利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA，测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中，对阳性克隆进行酶切和测序鉴定，将构建的重组质粒转染到CHO细胞中，分别提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位。结果酶切和测序鉴定表明，全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功，转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达，但仅全长表达产物定位于微管，缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位。结论SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长。该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础。; 汪智琼张玲石玉琴李红飞张志兵; 关键词：不育

通过哺乳细胞CRISPR/Cas9敲除文库实现高通量功能性基因筛选: 2014年; 探索基因及其表达蛋白在各种生理和病理过程中的作用是生命科学领域研究的永恒主题。对原核或者模式生物来说,有相对简单和成熟的遗传技术手段;但是对高等生物特别是哺乳类细胞或者个体,一直缺乏有效方法实现对特定基因的精准修饰来进行功能研究。随着近几年基因组靶向编辑技术的出现,对单一真核基因进行定点改变的遗传手段得以迅速发展。; 蔡昌祖周悦欣朱诗优魏文胜; 关键词：基因筛选高通量文库生命科学病理过程

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