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低强度超声介导的载双自杀基因纳泡对膀胱癌小鼠模型的治疗研究: 2020年; 目的:制备载胞苷脱氨酶-胸腺嘧啶激酶(colicytocinedeaminase-thymidinekinase,CD-TK)双自杀基因纳泡,用于治疗膀胱癌小鼠。方法:采用薄层法制备载CD-TK双自杀基因纳泡,合成CD-TK双自杀基因阳离子纳泡,光镜观察纳泡的形态,马尔文粒径仪测其粒径;建立裸鼠后膀胱癌模型,超声辐照肿瘤部位,转染双自杀基因,按实验分组每组连续腹腔注射无毒前药1周,开始记录每只裸鼠肿瘤的最长径和最短径,计算并记录肿瘤的体积变化;第5周取裸鼠肿瘤标本,免疫荧光评估肿瘤组织切片细胞凋亡和增殖情况。结果:本研究成功制备了载CD-TK双自杀基因纳泡。通过超声介导载CD-TK纳泡成功转染自杀基因,抑制肿瘤增殖和促进肿瘤凋亡。结论:载CD-TK纳泡可能成为治疗膀胱癌的一种新方式。; 胡聪江德鹏卢茂青杨旭张荣贵; 关键词：超声 CD-TK 膀胱癌

HSV-TK/CD20双自杀基因系统慢病毒载体的构建及应用被引量：2: 2019年; 目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成编码RQR8及HSV-TK的基因,构建慢病毒共表达载体pLV-RQR8-T2A-TK;脂质体Lipofectamine3000转染Jurkat细胞,流式荧光抗CD34单抗检测RQR8的表达,通过磁珠筛选获得RQR8+TK+Jurkat细胞;分别加入GCV或RTX检测自杀可控开关功能:CCK8法检测加药后细胞增殖情况,Annexin-V/PI检测细胞凋亡情况。结果慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK酶切片段大约1 670 bp,测序进一步证实外源片段插入正确。慢病毒感染Jurkat细胞,感染率为45.21%,磁珠纯化得到99.4%纯度的RQR8+TK+Jurkat。GCV对RQR8+TK+Jurkat具有细胞毒性作用,GCV浓度为40μmol/L时,其存活率为(52.11±7.04)%,IC50为20.66μmol/L。80μmol/L GCV作用RQR8+TK+Jurkat细胞72 h后凋亡率达(41.28±2.78)%。在血清(含补体)存在情况下,320μg/ml RTX可通过补体介导的细胞杀伤作用杀伤RQR8+TK+Jurkat,其存活率为(29.64±4.52)%。结论双自杀可控开关慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK构建成功,加入GCV或RTX可通过2种不同路径成功杀伤细胞,达到细胞清除目的,提高了安全性,为临床治疗过继免疫不良反应提供多种选择。; 家婷张涛邹强郑武燕赵日欧阳寒梅曹倩朱榕王茂庆叶鑫宇刘佳慧李华; 关键词：自杀基因 HSV-TK CD20 利妥昔单抗更昔洛韦

双自杀基因慢病毒表达载体及其应用: 本发明公开了一种双自杀基因慢病毒表达载体及其应用，它包括慢病毒载体及连接在慢病毒载体上的编码RQR8蛋白和HSV‑TK蛋白的核苷酸序列，编码RQR8蛋白和HSV‑TK蛋白的核苷酸序列之间通过编码连接肽的核苷酸连接。本发明...; 王晓东家婷; 文献传递

超声靶向介导载CD-TK双自杀基因的微泡对肺癌的治疗作用被引量：1: 2019年; 目的:制备载胞苷脱氨酶-胸腺嘧啶激酶(colicytocinedeaminase-thymidinekinase,CD-TK)双自杀基因的超声微泡,检测其对肺癌的杀伤效应。方法:制备载CD-TK双自杀基因的微泡,观察形态和大小,用碘化丙啶染质粒,观察荧光和计算微泡与基因的结合率。培养肺癌H1299细胞系和建立肺癌裸鼠模型,随机分为对照、超声(ultrasound,U)+微泡(microbubble,M)+CD-TK、U+M+CD-TK+5-FC(5-fluorcytosine,5-氟胞嘧啶)、U+M+CD-TK+GCV(ganciclovir,丙氧鸟苷)、U+M+CD-TK+5-FC+GCV 5组,每组1×107个细胞。微泡转染H1299肺癌细胞,24 h后观察细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)荧光表达情况,测定细胞GFP转染效果和每组24 h细胞凋亡和周期。体内动物实验,每组6只裸鼠,对照组注射200μL PBS,其余各组尾静脉注射等量的载CD-TK双自杀基因的微泡。观察微泡的显影,同时在肿瘤部位超声辐照转染基因,每组按实验分组连续腹腔注射5-FC、GCV一周,每周记录每只裸鼠肿瘤的最长径和最短径,计算并记录肿瘤的体积变化。第5周取裸鼠肿瘤标本。免疫荧光测TdT(TUNEL法)和PCNA的表达,评估肿瘤组织细胞凋亡和增殖情况。结果:成功制备出载CD-TK双自杀基因的微泡,无毒前药5-FC和GCV联合载CD-TK双自杀基因的超声微泡治疗效果明显,有促进凋亡[凋亡率(28.45±1.75)%]、抑制增殖作用[S期(61.40±4.31)%],疗效明显优于对照组及单药组(5-FC组P=0.002和GCV组P=0.012,对照组P=0.000)。双药联合超声辐照载基因微泡组的肿瘤体积最小、质量最小、凋亡细胞最多、增殖受抑制最明显。结论:无毒前药5-FC+GCV联合微泡载CD-TK双自杀基因能促进肺癌细胞凋亡,抑制其增殖,对肺癌有明显杀伤作用。; 胡聪杜晓燚江德鹏杨旭张荣贵; 关键词：肺癌自杀基因微泡超声

HSV-TK/CD20双自杀基因载体的构建及其对T细胞杀伤作用的研究: TCR-T和CAR-T细胞作为一种新型细胞药物，当前已在肿瘤过继免疫治疗(adoptivecelltherapy，ACT)临床试验中大量应用。其在体外对患者T细胞进行基因修饰，使之成为具有新特性功能的自体细胞药物，再回输...; 家婷; 关键词：双自杀基因外周血T细胞杀伤作用; 文献传递

肝癌双自杀基因逆转录病毒转染体系构建与鉴定被引量：1: 2018年; 目的进行肝癌双自杀基因逆转录病毒转移体系的建立及鉴定, 为后续将其转染肝癌细胞、并进行抗肝癌细胞株的功能实验和功效研究奠定基础.方法采用基因工程的方法, 将pWZLneoC-DglyTK质粒转化到 DH5α 感受态菌后, 提取质粒 DNA, 并采用酶切和 PCR 及 A260 nm 和 A260 nm/A280 nm吸光度测定等方法进行分析鉴定; 再将其质粒DNA用脂质体介导转染PA317 细胞, 然后经G418 筛选阳性克隆, 进行扩增培养PA317/CD+TK细胞, 即成功构建含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶( E. coli CD)和单状疱疹病毒胸苷激酶( HSV-tk)的肝癌双自杀基因逆转录病毒转移体系.结果转化的阳性菌株可在含Amp的琼脂上生长; 质粒经1%琼脂糖凝胶电泳后可见有质粒 DNA 存在; 经单酶切和双酶切后, 分别显示相应的电泳条带; PCR鉴定可见有扩增出的CD和TK阳性条带, 测定DNA浓度为5. 25 μg/μl, 纯度为1. 81.同时, 两种质粒转入PA317 细胞48 h后荧光显微镜下可观察细胞内有绿色荧光产生, 其转染效率约为20% ~30% ; CD、 TK基因PCR分别扩增, 已整合到PA317 细胞基因组上, 其基因PCR产物的相应处分别有一特异性条带; 将RNA逆转录后进行PCR扩增, CD、 TK基因在 PA317 细胞中得到表达, 其基因RT-PCR产物的相应处也分别有一特异性条带; 另外, 透射电镜下观察到培养液上清液中病毒颗粒散在或聚集成堆, 呈圆球形, 边缘呈波状, 直径约100 nm.结论采用上述方法并通过分析鉴定结果证实,已成功构建出肝癌双效自杀基因逆转录病毒转移体系, 这将为今后该体系对人类肝癌细胞系的 HepG2 及联合肝癌双效自杀基因前体药物并结合天然抗癌药物共济增效及代谢协同杀伤肝癌细胞奠定治疗物质和方法学基础.; 谭铖洸林丽珠; 关键词：基因疗法双自杀基因逆转录病毒载体胸苷激酶基因胞嘧啶脱氨酶基因

双自杀基因治疗多药耐药胶质瘤的研究: 目的:研究多药耐药基因启动子（MDR1）靶向控制的CD-TK双自杀基因系统并加前体药物丙氧鸟苷（GCV）及5-氟胞嘧啶（5-FC）对MDR1高表达的耐药胶质瘤细胞（C6/ADR细胞）的体外特异性杀伤作用。方法:在体外建立...; 宫杰张源王传伟王建刚; 关键词：多药耐药胶质瘤前体药物凋亡自杀基因; 文献传递

pAdKDR/CD/TK双自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用的试验研究被引量：1: 2017年; 目的探讨含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法观察不同前药对HepG2细胞、血管内皮细胞ECV304和LST174细胞的杀伤作用,评估KDR启动子的靶向杀伤作用。观察不同前药对转染不同自杀基因的HepG2细胞的杀伤作用,及旁观者效应。结果转染腺病毒的HepG2细胞及血管内皮ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,而感染腺病毒的LST174细胞对前药不敏感(P<0.05)。当转染细胞混合比例为50%时,应用前药后,转染CD/TK,CD,TK的HepG2细胞生存率分别为11.8±1.2%、41.3±3.7%、43.1±2.3%(P<0.05)。结论含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞具有高度靶向杀伤作用;联合用药对转染双自杀基因的肝癌HepG2细胞具有协调增强杀伤作用。; 谷洋刘志毅金虎刘明孙铁梁; 关键词：双自杀基因 KDR启动子肝癌细胞基因

双自杀基因与芪三酚对人肝癌HepG2细胞系的杀伤作用及协同效应研究: 肝癌系原发于人类肝脏组织及脏器的癌症,也是发生于肝细胞与肝内胆管上皮细胞的恶性病变,是临床肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一,也是世界卫生组织公布的十大恶性肿瘤之一。肝癌细胞具有极强的浸润性,其恶性程度极高,预后极差,且临床确诊...; 谭成光; 关键词：逆转录病毒单纯疱疹病毒胸苷激酶; 文献传递

一种携带双自杀基因的可回复永生化肝细胞株及其构建方法: 本发明提供了一种可回复永生化肝细胞株的构建方法，从胚胎期12.5～14.5d天的小鼠肝脏中分离肝脏祖细胞，导入含有SV40T基因和HSV‑TK基因的逆转录病毒，筛选具有肝祖细胞标志及向成熟肝细胞分化功能的单克隆细胞株，再...; 毕杨何昀何通川唐霓黄佳祎; 文献传递

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