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长波紫外线对黑素瘤细胞中视蛋白3的表达及细胞增殖的影响
2024年
目的研究长波紫外线对黑素瘤细胞中视蛋白3(OPN3)的表达及对细胞增殖的影响。方法利用不同剂量的UVA分别照射黑素瘤细胞系(A375细胞和MV3细胞)后,通过5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验及细胞增殖与活性检测试剂(CCK-8)检测照射前后细胞的增殖情况,实时荧光定量(RT-qPCR)分别检测细胞中视蛋白(OPN)的mRNA表达水平;利用慢病毒技术分别沉默和过表达A375细胞和MV3细胞中的OPN3,采用EdU实验及CCK-8方法检测细胞的增殖水平;沉默A375细胞和MV3细胞中OPN3后进行UVA照射,通过EdU及CCK-8方法检测照射前后细胞增殖的变化;采用转录组测序技术检测过表达及沉默OPN3的MV3细胞中差异基因的表达,并进行KEGG富集相关信号通路分析,免疫印迹法(Western blot)验证Hippo信号通路相关蛋白的表达情况。结果与Control组相比,UVA照射组中的细胞增殖能力明显增强(P<0.05);RT-qPCR结果显示,OPN1、OPN2、OPN3、OPN4以及OPN5在A375和MV3细胞中均有表达,其中OPN3的转录表达水平水平均明显高于其他OPN(P<0.05);UVA照射组中A375和MV3细胞OPN3蛋白表达水平明显升高,沉默OPN3的表达后,A375和MV3细胞的增殖能力减弱,过表达OPN3后A375和MV3细胞的增殖能力增强(P<0.05);沉默黑素瘤细胞(A375细胞和MV3细胞)OPN3后经UVA照射,细胞增殖能力较单纯照射UVA时降低(P<0.05);沉默及过表达MV3细胞中OPN3的表达后,RNA-seq测序结果筛选出141个差异基因,KEGG分析筛选差异基因富集信号通路9条,其中-Log10(FDR)值最高的为Hippo信号通路;沉默OPN3后,检测到LATS1表达水平增加,p-YAP、YAP、RhoA蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论UVA可促进黑素瘤细胞系(A375细胞和MV3细胞)OPN3的表达,并通过Hippo信号通路调控细胞的增殖过程。
张玉蕾曾雯张伟董仙冯江龙靳姝琦罗欢欢刘婷陆洪光
关键词:黑素瘤增殖长波紫外线
CDCA8沉默对黑素瘤细胞A375增殖及侵袭的影响
2024年
目的通过生物信息学分析细胞分裂周期相关基因(CDCA)8在黑素瘤组织中的表达水平及其与预后的关系,探讨CDCA8基因沉默后对黑素瘤细胞A375增殖和侵袭的影响。方法通过生物信息数据库(TCGA)分析黑素瘤组织中CDCA8 mRNA表达水平,黑素瘤患者预后的影响因素采用Cox回归分析。采用Western印迹和实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测黑素瘤细胞系(A375、A875和SK-MEL-28)中CDCA8蛋白及mRNA表达水平,选择CDCA8高表达的细胞系A375,瞬时转染小干扰RNA敲低CDCA8表达,根据是否转染,分为空白对照组、NC组和si-CDCA8组,采用CCK-8、Transwell实验及Western印迹等分析CDCA8基因沉默对黑素瘤A375细胞系增殖、侵袭及p-P53蛋白表达水平的影响。结果黑素瘤组织中CDCA8 mRNA表达水平较正常组织水平显著升高(P<0.001)。与CDCA8低表达组相比,CDCA8高表达组总体生存期显著降低(P<0.05)。Cox结果显示,T期(T3和T4)、N期(N2和N3)和CDCA8表达(高表达)均是黑素瘤患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。与黑素瘤A875和SK-MEL-28细胞系相比,CDCA8蛋白及mRNA在黑素瘤A375细胞系显著高表达(P<0.05)。在72、96 h,si-CDCA8组细胞OD值均显著低于空白对照组和NC组(均P<0.05)。与空白对照组和NC组相比,si-CDCA8组细胞侵袭细胞数显著减低,p-P53蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论CDCA8 mRNA在黑素瘤组织中呈高表达,且CDCA8高表达与黑素瘤患者的不良预后有关。CDCA8可能通过调控P53信号通路参与黑素瘤细胞A375的增殖和侵袭。
张洁甘才斌王丽霞王俊杰王延乾
关键词:黑素瘤增殖
依巴斯汀通过抑制AKT/mTOR通路诱导黑素瘤细胞自噬
2022年
目的:研究依巴斯汀对黑素瘤细胞自噬的影响及机制。方法:体外培养黑素瘤细胞A375和M14,采用CCK-8增殖实验检测细胞活力,并计算IC50;利用mCherry-EGFP-LC3B双荧光指示系统检测自噬流;采用Western blot验证自噬相关蛋白LC3,Beclin1及信号通路蛋白的表达。结果:依巴斯汀可显著抑制黑素瘤细胞的活力;依巴斯汀明显诱导黑素瘤细胞中自噬小体和自噬溶酶体的产生;依巴斯汀显著上调黑素瘤细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值以及Beclin1的表达,同时抑制AKT/mTOR信号通路的活化,降低p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR。结论:依巴斯汀通过抑制AKT/mTOR通路诱导黑素瘤细胞自噬的发生。
张平王静王颖超倪莉李明明党宁宁
关键词:依巴斯汀人黑素瘤细胞自噬
丙戊酸钠通过MEK/ERK信号通路上调NKG2D配体表达增强NK细胞对A375黑素瘤细胞的杀伤被引量:2
2022年
目的探讨丙戊酸钠(VPA)通过丝裂原激活激酶激酶/细胞外信号调节激酶(MEK/ERK)信号通路对自然杀伤细胞2组成员D(NKG2D)配体表达及自然杀伤(NK)细胞杀伤黑素瘤细胞的影响。方法采用1 mmol/L VPA处理对数生长期的A375细胞24 h,Western blot法检测主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关分子A(MICA)、主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关分子B(MICB)、磷酸化的MEK(p-MEK)、MEK、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)与ERK1/2的蛋白表达水平;流式细胞术检测MICA与MICB的表达;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK92细胞对A375黑素瘤细胞的杀伤活性;使用MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059联合VPA处理A375细胞,Western blot法检测MICA、MICB蛋白表达,流式细胞术检测MICA与MICB的表达;LDH释放法检测NK92细胞对A375黑素瘤细胞的杀伤活性。非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠成实验检测黑素瘤体积变化,免疫组织化学染色法检测MICA与MICB的表达。结果与对照组相比,VPA组A375细胞MICA与MICB的表达升高,NK92细胞对A375细胞的杀伤率增加,p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2比值升高。与VPA组相比,VPA联合PD98059组A375细胞MICA与MICB的表达降低,NK92细胞对A375细胞的杀伤率降低;与NK92细胞组相比,NK92细胞联合VPA组NOD/SCID小鼠肿体积减少,MICA与MICB表达升高;与NK92细胞联合VPA组相比,NK92细胞联合VPA和PD98059组NOD/SCID小鼠肿体积增加,MICA与MICB表达降低。结论VPA上调黑素瘤细胞MICA与MICB表达,增强NK92细胞黑素瘤的杀伤活性,可能与MEK/ERK信号通路的激活有关。
李生存王永燕华玲
关键词:MICB
紫铆花素上调黑素瘤细胞A375酪氨酸酶活性及其相关蛋白表达被引量:2
2022年
目的探讨驱虫斑鸠菊(Vernonia anthelmintica willd)的黄酮类化合物-紫铆花素对A375细胞黑素合成作用的影响。方法采用MTT法、L-Dopa氧化法、NaOH裂解法、Realtime PCR法及Western印迹法分别检测紫铆花素对细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性及相关mRNA和蛋白表达的影响。结果在0.5~5.0μg/mL浓度范围内,紫铆花素能够促进A375细胞黑素合成和酪氨酸酶(TYR)活性,上调酪氨酸酶相关蛋白(TRP)-1、TRP-2和小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA和蛋白表达,且无明显细胞毒性。结论紫铆花素可以通过提高酪氨酸酶活性以及促进其相关基因的mRNA和蛋白表达水平,诱导A375细胞黑素合成水平。
高莉霍仕霞谭雪闫明
关键词:黑素合成酪氨酸酶
全反式维甲酸对黑素瘤细胞转录组调控及其对CD20阳性的黑素瘤细胞影响研究
陈星宇
CDK4/6抑制剂哌柏西利对黑素瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响被引量:3
2020年
目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinases 4/6,CDK4/6)抑制剂哌柏西利对恶性黑素瘤SK-MEL-5和A375细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外培养黑素瘤A2058、SK-MEL-5和A375细胞,以耐药A2058细胞作为阴性对照。用不同浓度的哌柏西利处理细胞24和48 h后,采用CellTiter-Glo?发光法检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞增殖的影响。碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色后检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞周期的影响,蛋白质印迹法检测哌柏西利对SK-MEL-5和A375细胞细胞周期相关蛋白[CDK4、CDK6、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、视网膜母细胞蛋白(retinoblastoma protein,Rb)和磷酸化Rb(phospho-Rb,p-Rb)]表达的影响。AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞凋亡的影响。采用NOD/SCID小鼠建立A2058、SK-MEL-5和A375细胞的皮下移植模型,将小鼠分为2组[哌柏西利(80 mg/kg)处理组和乳酸钠缓冲液处理组],通过体内实验验证哌柏西利的安全性和疗效。结果:与阴性对照A2058细胞相比,哌柏西利对SK-MEL-5和A375细胞的增殖具有明显抑制作用(P值均<0.001)。哌柏西利能够引起SK-MEL-5和A375细胞中G1期细胞所占比例增高(P值均<0.05);蛋白质印迹法检测发现哌柏西利能够使SK-MEL-5和A375细胞细胞周期G1/S期检查点关键蛋白CDK4、CDK6、cyclin D1以及p-Rb的表达水平明显下调(P值均<0.001)。哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞均未见明显的促凋亡作用(P值均>0.05)。在荷小鼠模型中,哌柏西利安全性高,对小鼠移植的生长具有明显的抑制作用[对SK-MEL-5细胞移植的抑制率为(64.6±9.8)%,对A375细胞移植的抑制率为(76.3±6.6)%](P值均<0.001)。结论:哌柏西利对黑素瘤SK-MEL-5和A375细胞的增殖具有明显抑制作用,可引起细胞周期G1期阻滞。
邓龙徐敏付蕾杜冠群王利
关键词:动物实验细胞增殖细胞周期检测点
慢病毒介导SOX9下调体外抑制黑素瘤细胞MV3的转移潜能被引量:1
2019年
目的研究慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白9(SOX9)下调对黑素瘤细胞转移潜能的影响。方法在黑素瘤细胞MV3中转染SOX9 shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒,Realtime PCR和Western blot检测干扰效果。CCK-8法检测各组细胞增殖能力变化,克隆形成实验测定各组细胞克隆形成能力,划痕愈合实验检测各组细胞运动能力,Transwell小室检测各组细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测各组细胞中EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin和侵袭迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9水平变化。结果与阴性对照慢病毒转染的细胞比较,SOX9 shRNA慢病毒转染后细胞中的SOX9 mRNA和蛋白水平降低,同时细胞增殖和克隆形成能力降低,细胞运动、侵袭和迁移能力也下降,细胞中MMP-2、Vimentin、MMP-9蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高。结论慢病毒介导的SOX9下调具有体外抑制黑素瘤细胞转移潜能的作用。
汪峰汪小柳刘志军武松江
关键词:黑素瘤SOX9
308nm准分子光联合他克莫司对黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响
2019年
目的探讨308nm准分子光联合他克莫司对黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法体外A875黑素瘤细胞培养。将A375黑素瘤细胞分为四组:正常对照组、308nm准分子光组(100 mJ/cm2)、他克莫司(10 nmol/L)组及308准分子光(100 mJ/cm2)联合他克莫司(10 nmol/L)组(以后均称联合组)。作用48h后MTT法测定每组对A875黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH法测定每组对黑素合成的影响。结果与对照组相比,联合组A875黑素瘤细胞的增殖率及黑素合成明显增加(P<0.001)。结论308准分子光及他克莫司联合使用可以促进A875黑素瘤细胞的增殖及黑素合成,为白癜风的临床治疗方案进一步提供理论依据。
王静杨涛李媛马光辉舒春梅张玉杰
关键词:他克莫司
毫米波电磁场辐照可诱导黑素瘤细胞凋亡
2019年
目的研究毫米波电磁场辐照对黑素瘤A375细胞凋亡的影响。方法研究共分为两部分:电磁场计算实验和细胞实验。电磁场计算实验通过模拟毫米波辐照细胞这一生物物理过程,计算并对比分析比吸收率(SAR)的均匀性及强度,得出最佳辐照参数。细胞实验中,A375细胞以35.2 GHz毫米波分别辐照15、30、60、90 min,非辐照组除不接受辐照外其他环境与辐照组保持一致,caspase-3抑制剂(AC-DEVD-fmk)组在毫米波辐照90 min前以10μmoL的AC-DEVD-fmk预处理1 h。用CCK-8法检测辐照组,非辐照组及AC-DEVD-fmk预处理组的细胞活性。用Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡情况,蛋白印迹法检测细胞内凋亡蛋白caspase-3的表达水平。结果电磁计算得出的最佳辐照方式为沿天线线极化方向,入射场垂直于塑料培养皿底部,自下而上辐照。CCK-8细胞活性检测法的结果表明,毫米波对A375细胞活性具有抑制作用(P<0.05),且呈时间依赖性。与非辐照组相比,15、30、60、90 min毫米波辐照组A375细胞的凋亡率显著升高(P<0.05)。辐照组A375细胞中caspase-3表达水平明显增加,应用caspase-3抑制剂后可以逆转毫米波辐照对细胞活性的抑制作用,细胞活性率由(36.7±0.09)%增加到(59.8±0.06)%,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 35.2 GHz毫米波辐照可以通过激活caspase-3诱导A375细胞凋亡。
赵瑞亭刘永泓刘思达罗童钟广元刘安琪曾强辛学刚
关键词:比吸收率电磁计算凋亡辐照

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刘邦民
作品数:79被引量:265H指数:10
供职机构:第四军医大学
研究主题:白癜风 黑素细胞 黄芩素 黄褐斑 氧化应激损伤
邓瑞春
作品数:34被引量:286H指数:10
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