为进一步探究兰坪乌骨绵羊乌质性状形成机理,该试验选取兰坪乌骨绵羊和来自兰坪的普通绵羊各50只作为样本,基于前期全基因组测序筛选的SLC17A8基因(solute carrier family 17 member 8)在兰坪乌骨绵羊具有12个高度连锁、高等位基因频率的SNP,故选择该基因作为候选基因,设计11对特异性引物对2个绵羊类群SLC17A8基因12个外显子及其侧翼区进行PCR扩增;通过紫外可见光谱法测定血液黑色素指标(TYR活力、血浆比色、脱黑色素、碱溶性黑色素、真黑色素/总黑色素);分析SLC17A8基因多态性与兰坪乌骨绵羊乌质性状的关联性。结果显示:除脱黑色素外,兰坪乌骨绵羊与普通绵羊其他各项黑色素指标差异显著(P<0.05),兰坪乌骨绵羊TYR活力、血浆比色、真黑色素/总黑色素显著高于普通绵羊;关联分析表明,EX1-G139A位点上CC型绵羊、EX2-C87A位点上AA型绵羊、EX4-C149T位点和EX4-T158C位点上CT型绵羊及EX7-C181T位点和EX7-T195C位点上TT型绵羊TYR活力均显著高于其它基因型绵羊(P<0.05),综上所述,CC、AA、CT和TT型为兰坪乌骨绵羊的优势基因型。
根据NCBI收录的绵羊SLC17A8(Solute Carrier Family 17 Member 8)基因序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增兰坪乌骨绵羊SLC17A8基因外显子区,经测序后拼接序列,并对编码区序列以及翻译后蛋白序列进行蛋白结构预测。结果显示,兰坪乌骨绵羊SLC17A8基因编码区长为1770 bp,编码589个氨基酸。同源性比对显示兰坪乌骨绵羊SLC17A8氨基酸序列与普通绵羊的该基因氨基酸序列同源性达到99.66%,发现有11个突变位点,其中2个错义突变位点,SLC17A8-Exon1 G159A位点编码的氨基酸由Gly(甘氨酸)突变到Glu(谷氨酸);SLC17A8-Exon2 G87A位点编码的氨基酸由Gly突变到Arg(精氨酸)。蛋白结构预测显示,SLC17A8蛋白空间结构主要有α螺旋、β转角和无规则卷曲。
