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一株丝状支原体山羊亚种SXTG01及其应用、丝状支原体山羊亚种疫苗及其制备方法: 本发明属于属于畜牧业动物疫苗技术领域，具体涉及一株丝状支原体山羊亚种SXTG01及其应用、丝状支原体山羊亚种疫苗及其制备方法。本发明提供了一株丝状支原体山羊亚种SXTG01，已进行生物保藏，保藏于中国微生物菌种保藏管理委...; 贺俊平白涛岳伟东李东晓王巾赵子惠李佳容常倩文

丝状支原体山羊亚种LPPA蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：3: 2022年; 【目的】建立基于丝状支原体山羊亚种(Mmc)膜脂蛋白LPPA的间接ELISA方法。【方法】扩增Mmc LPPA基因并将其克隆至pCold-Ⅰ载体,构建重组质粒pCold-Ⅰ-LPPA,测序鉴定正确后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经IPTG诱导表达后纯化得到Mmc LPPA重组蛋白,采用SDS-PAGE验证该重组蛋白是否表达,并采用Western blotting和传统经典的琼脂扩散血清学试验分析其与Mmc阳性血清的反应原性。以该重组蛋白为包被抗原,建立Mmc重组LPPA蛋白的间接ELISA抗体检测方法,对该方法进行反应条件优化后开展特异性、重复性试验,并将其初步应用于184份山羊血清样本。【结果】通过PCR扩增得到Mmc LPPA基因,成功构建了重组质粒pCold-Ⅰ-LPPA,经诱导表达后得到Mmc LPPA重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,获得了大小约23 ku的LPPA重组融合蛋白;琼脂扩散及Western blotting试验证明该蛋白反应原性良好。ELISA方法反应条件优化结果显示,LPPA抗原蛋白的包被浓度为2.0μg/100μL,血清稀释度为1∶300,3%BSA封闭1 h为最佳反应条件,临界值为2.738。本试验建立的间接ELISA方法批内和批间变异系数均<10%,证明该方法具有良好的重复性;对绵羊肺炎支原体(Mo)、蓝舌病病毒(BTV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口蹄疫病毒(FMDV)、弓形虫及山羊痘病毒(GPV)标准阳性血清的检测均为阴性,表明该方法特异性较强;184份临床血清临床应用结果显示,该方法与正向间接血凝诊断试剂盒检测结果阳性符合率为93.33%,阴性符合率为75.23%,两者相对符合率为82.61%。【结论】本研究成功建立了Mmc LPPA蛋白间接ELISA抗体检测方法,为临床Mmc血清抗体水平的监测及Mmc血清流行病学调查奠定了基础。; 陈静吴燕李梅岳筠朱二鹏文明张双翔张双翔; 关键词：间接ELISA

鉴别丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种的HRM引物及方法: 本发明提供鉴别丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种的HRM引物及方法，属于兽医传染病快速诊断技术领域。HRM内引物上游引物为107F：CAATACATCCATTARMACTCTTGA，下游引物为107R：GAATW...; 胡奇林张靖鹏江锦秀林裕胜游伟; 文献传递

鉴别丝状支原体山羊亚种和丝状支原体簇其它成员PCR-RFLP引物及方法: 本发明提供鉴别丝状支原体山羊亚种和丝状支原体簇其它成员PCR‑RFLP引物及方法，所述引物上游P1：5'‑ACAAAAAATATTAGCATTCAAACTT‑3'，下游引物P2：5'‑GGTGTTATTTTTGATTTA...; 林裕胜胡奇林游伟江锦秀张靖鹏; 文献传递

一株丝状支原体山羊亚种SXTG01及其应用、丝状支原体山羊亚种疫苗及其制备方法: 本发明属于属于畜牧业动物疫苗技术领域，具体涉及一株丝状支原体山羊亚种SXTG01及其应用、丝状支原体山羊亚种疫苗及其制备方法。本发明提供了一株丝状支原体山羊亚种SXTG01，已进行生物保藏，保藏于中国微生物菌种保藏管理委...; 贺俊平白涛岳伟东李东晓王巾赵子惠李佳容常倩文

丝状支原体山羊亚种LppA蛋白N末端基因真核表达载体构建及小鼠免疫效果分析: 2022年; 基于丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)贵州株的LppA蛋白N末端基因,构建真核重组表达质粒pVAX1-LppA,并对免疫效果进行分析,为防控羊支原体肺炎提供新思路。以构建的真核重组表达质粒pVAX1-LppA(50、100、150μg)、pVAX1空载体、无菌PBS分别免疫小鼠。通过ELISA方法检测小鼠血清中抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)水平,MTT法检测脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞占总细胞数比例的变化,攻毒试验评估对小鼠的保护效率,并采集小鼠肺制备切片以观察病理变化。结果显示:与空载体pVAX1组及PBS对照组相比,重组质粒pVAX1-LppA组小鼠体内的抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)水平显著升高,脾细胞增殖能力更强,CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞占总细胞数的比例显著增多,对小鼠具有一定的攻毒保护能力,肺部病理损伤明显减轻,发病动物数量减少,其中100μg的重组质粒pVAX1-LppA保护率最高,为80%。综上表明,LppA蛋白具有良好的免疫原性,重组质粒pVAX1-LppA能激活强烈的体液免疫和细胞免疫应答,可作为羊支原体肺炎的候选疫苗。; 尹德晶吴燕岳筠杨鹏陈静王慧张双翔王开功程振涛; 关键词：丝状支原体山羊亚种

绵羊肺炎支原体P113蛋白和丝状支原体山羊亚种LppA蛋白共表达质粒对小鼠免疫应答的研究被引量：4: 2022年; 为研究绵羊肺炎支原体(Mo)P113基因和丝状支原体山羊亚种(Mmc)LppA基因的共表达质粒免疫小鼠后对其免疫系统的影响,本研究构建了真核重组质粒pVAX1-P113-LppA,并经PCR、双酶切及测序鉴定正确后转染MDBK细胞,利用PCR及间接免疫荧光试验(IFA)分别检测P113蛋白和LppA蛋白的表达,结果显示,正确构建了含Mo P113基因及Mmc LppA基因的重组质粒pVAX1-P113-LppA;且该重组质粒在MDBK细胞中能有效转录并表达目的蛋白。分别在0、7 d、14 d时以100μg/只pVAX1-P113-LppA腿部肌肉注射免疫BABL/c小鼠,并设Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组,通过MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况,并在初次免疫后28 d利用流式细胞术分析各组小鼠脾细胞中CD4^(+)T淋巴细胞和CD8^(+)T淋巴细胞所占总淋巴细胞数的变化,同时采用的ELISA方法检测小鼠免疫后血清特异性抗体和细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)的分泌情况。结果显示,重组质粒组小鼠脾淋巴细胞增殖能力极显著高于对照组和空载体组(P<0.01),且该组小鼠脾CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞在免疫28 d时较Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组均极显著上升(P<0.01);该组小鼠免疫后7 d的血清特异性抗体水平极显著升高(P<0.01),在初次免疫后第49 d特异性抗体仍为阳性;血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌水平较Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组均呈显著上升趋势(P<0.05),且在首次免疫后28 d时分泌量最高,而后缓慢下降。攻毒试验结果显示,重组质粒pVAX1-P113-LppA对小鼠具有一定的免疫保护能力,小鼠肺部病理损伤明显减轻,发病数量减少。本实验首次表明重组质粒pVAX1-P113-LppA能诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,Mo P113基因和Mmc LppA基因可以作为羊支原体肺炎(MPSG)DNA疫苗的候选基因,该结果为MPSG核酸疫苗的研究与应用提供实验基础。; 杨鹏吴燕岳筠陈静李梅王慧张双翔文明程振涛; 关键词：绵羊肺炎支原体丝状支原体山羊亚种共表达免疫应答

丝状支原体山羊亚种对山羊的致病性观察被引量：1: 2021年; 为了观察丝状支原体山羊亚种对山羊的致病性,利用丝状支原体山羊亚种Mm1901株培养物经鼻腔和气管感染山羊,观察山羊临床表现、剖检病变、血液学变化、组织病理和病原组织器官分布等疾病指征。攻毒结束后第2天,山羊表现出明显的急性感染症状,并在第3天出现死亡或濒临死亡。剖检见多组织器官出现水肿、淤血、出血等病理变化,血常规检测提示急性细菌性炎症,病理切片主要表现为多组织器官炎性细胞浸润,肾脏玻璃样变、空泡变性等变化。通过病原分离和荧光定量PCR(qPCR),可从多组织器官中检测到病原。结果表明,丝状支原体山羊亚种人工感染可导致山羊全身多器官和组织系统性病变,是一种可导致系统性感染的病原,为我国羊支原体肺炎病原学研究积累了数据。; 陈芙袁婷郝华芳储岳峰颜新敏王鹏雁; 关键词：丝状支原体山羊亚种山羊

一种用于检测丝状支原体山羊亚种的引物和探针: 本发明提供一种用于检测丝状支原体山羊亚种的引物和探针，所述引物序列为上游引物：5’‑CTAGCTAGCATAGTTGTTG‑3’，下游引物：5’‑GCTTGAACAACTATATTGTA‑3’所述探针序列为：5’‑TAA...; 林裕胜胡奇林江锦秀游伟; 文献传递

一种用于丝状支原体山羊亚种的荧光定量PCR检测引物: 本发明提供一种用于丝状支原体山羊亚种的荧光定量PCR检测引物，所述引物序列为上游引物：5’‑ TGTTGTTGGTGGGTCTGCTT‑3’，下游引物：5’‑ ACTTTATCAGCCGCCATTTGA‑3’。本发明根据...; 林裕胜胡奇林江锦秀张靖鹏游伟; 文献传递

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