搜索到201篇“ Β-ACTIN基因“的相关文章
- 草地贪夜蛾β-Actin基因的原核表达及多克隆抗体制备
- 2023年
- 草地贪夜蛾是一种重要的农业害虫,其迁飞性强、寄主广、繁殖力高,给我国农业经济带来了严重损失。从分子水平探究草地贪夜蛾生长、发育、繁殖、抗药性形成的内在分子机理,能为虫害的防治、防控提供重要参考。β-Actin作为一种高度保守的看家蛋白常在分子生物学中用作内参去定量目标蛋白的表达水平,因而获得高质量的β-Actin抗体是从事相关分子研究的基本前提。因此,本研究克隆了草地贪夜蛾β-Actin基因部分编码序列,长度为579 bp。利用原核表达系统诱导获得了约37 kD的β-Actin重组蛋白,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备得到β-Actin多克隆抗体血清。经ELISA检测,获得的抗血清效价达1∶256000。利用制备的β-Actin抗血清进行Western blot试验,结果显示在42 kD处出现强且单一的蛋白条带,说明制备的β-Actin抗血清能有效识别草地贪夜蛾β-Actin蛋白。综上,本研究制备的β-Actin多克隆抗体效价高、特异性较强,能为草地贪夜蛾后续相关分子研究提供基本条件。
- 罗海玲夏顺超卢琴李海银
- 关键词：Β-ACTIN原核表达多克隆抗体
- 大头金蝇β-actin基因克隆与多克隆抗体制备被引量：2
- 2018年
- 为深入研究大头金蝇Chrysomya megacephala(Fabricius)关键功能基因的表达调控,运用RT-PCR和RACE技术,克隆获得大头金蝇β-actin基因cDNA全长序列(GenBank登录号为KC207081),并对其进行生物信息学分析。大头金蝇β-actin基因cDNA全长1 355 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 131 bp,编码376个氨基酸,5'UTR长度为87 bp,3'UTR约为110 bp。ORF编码的蛋白质分子量为41.8 D,等电点5.286,氨基酸序列与其他昆虫β-actin一致性高达97%-99%,且含有由6个β-actin蛋白家族特有的保守模式(motif)所构成的指纹。根据对β-actin氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性分析预测,设计并合成β-actin抗原多肽(CysGPYARVKRHQKGLKT),免疫新西兰兔获得多克隆抗体,其效价远高于1∶64 000。采用Western Blot技术检测大头金蝇各发育阶段的β-actin蛋白表达,结果表明β-actin表达恒定。本文的研究结果为大头金蝇功能基因的深入研究提供了坚实的基础。
- 张敏张敏
- 关键词：大头金蝇Β-ACTIN基因克隆抗原多肽BLOT
- 猪IGF1、EGFR、EGF、β-actin基因荧光定量PCR标准曲线的建立被引量：2
- 2017年
- 为建立用荧光定量PCR方法检测猪IGF1、EGFR、EGF、β-actin基因表达量的标准曲线,本试验根据目的基因在NCBI上CDS区序列,设计合成引物,构建目的基因重组质粒,采用SYBR GreenI荧光定量RT-PCR的检测方法,构建检测猪IGF1、EGFR、EGF、β-actin基因表达量的标准曲线。结果显示,由pEASY-T1目的基因所构建的标准曲线线性关系良好,线性回归系数(R2)均大于或等于0.99,起始模板与Ct值之间呈良好的线性关系,溶解曲线峰值单一,表明引物具有很好的特异性,结果准确可靠。本研究成功构建了用荧光定量RT-PCR方法检测猪IGF1、EGFR、EGF、β-actin基因表达量的标准曲线,为后续检测基因相对表达量的变化奠定基础。
- 徐环叶曹玲芝刘博陈立功孟利佳崔欢库尔瓦尼古丽.伊明江董世山
- 关键词：修复基因重组质粒
- 小鼠β-actin基因的RT-PCR克隆与真核表达被引量：3
- 2016年
- 以Trizol-异丙醇法提取小鼠肝脏总RNA,根据NCBI数据库中小鼠β-actin基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增小鼠β-actin基因编码区并测序;以pcDNA3.1-flag为载体,构建β-actin基因真核表达质粒,继而将其重组产物转染于HeLa细胞,采用Western blot印迹法鉴定重组蛋白pcDNA3.1-flag/β-actin的表达水平。结果表明：克隆获得的289 bp片段与NCBI数据库中β-actin基因序列完全吻合,并且成功构建的pcDNA3.1-flag/β-actin真核基因表达载体,其重组质粒可在HeLa细胞中有效表达约43×10^3KD融合蛋白。
- 王丹丹李冬颖
- 关键词：小鼠Β-ACTIN基因RT-PCR克隆真核表达
- 金铁锁β-actin基因克隆及其作为内参基因的研究被引量：2
- 2016年
- 目的:建立金铁锁β-actin基因实时荧光定量PCR方法,为金铁锁实时荧光定量PCR的检测提供了内参基因。方法:根据Gen Bank上β-actin基因保守区域设计特异性引物,利用PCR扩增的方法扩增β-actin目的片段。并以β-actin作为内参基因,利用荧光定量PCR技术对糖基转移酶基因(UGT)在金铁锁根、茎、叶组织中的表达情况进行分析。结果:扩增到金铁锁的β-actin基因序列,长度为153 bp,与王不留行、鹅肠菜、马齿苋的β-actin有较高的同源性。而糖基转移酶基因在以β-actin作为内参基因时能够在金铁锁的不同组织稳定表达。结论:金铁锁β-actin基因是一个可靠的内参基因,适合在金铁锁三萜皂苷生物合成相关功能基因的表达研究中作为内参基因。
- 李媛张爱丽李国栋钱子刚
- 关键词：金铁锁Β-ACTIN实时荧光定量PCR
- 米蛾β-actin基因cDNA片段的克隆及表达量检测
- 2016年
- 为克隆米蛾[Corcyra cephalonica(Stainton)]β-actin基因cDNA片段,建立米蛾β-actin基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,并评估其在实时荧光定量研究中作为内参基因的可靠性,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得米蛾β-actin基因cDNA片段,采用SYBR GreenⅠ染料法建立qRT-PCR方法,检测在米蛾卵、幼虫、蛹和成虫4个虫态中β-actin基因的表达量。获得了长为822bp的米蛾β-actin基因片段(Gen Bank accession:KJ599569),编码273个氨基酸残基;荧光定量标准曲线的Ct值检测范围为13~28,扩增效率为90.1%,相关系数R^2=0.992,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为(84±0.5)℃,符合定量要求;实时荧光定量结果表明,β-actin基因在米蛾不同发育历期中的表达水平无显著性差异(p>0.05)。成功建立了米蛾β-actin基因qRT-PCR方法 ,β-actin基因可以作为米蛾基因表达定量研究中的可靠内参基因。研究结果为β-actin作内参基因进行米蛾功能基因表达差异研究奠定了分子基础。
- 丛斌张明珠胡志凤段立佳王晓静张统书董辉
- 关键词：米蛾Β-ACTIN基因反转录PCR实时荧光定量PCR
- CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建被引量：5
- 2016年
- 目的制备用于CYP4F2和β-actin基因mRNA实时荧光定量PCR检测的标准品质粒与标准曲线。方法通过PCR扩增CYP4F2和β-actin进行双酶切鉴定和测序分析,确保重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,目的片断纯化后直接连接于p GEM-T easy载体,转化E.coli DH5α宿主菌,获得阳性克隆;通过PCR扩增进行荧光定量PCR检测分析。结果 CYP4F2和β-actin基因目的片段均成功重组,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性。梯度浓度标准质粒的实时荧光定量PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系。结论成功构建了CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线。
- 赵永攀石磊李晋李晓泽李健赵树进
- 关键词：Β-ACTIN基因实时荧光定量PCR重组质粒标准品
- CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建
- 目的制备用于CYP4F2和β-actin基因m RNA实时荧光定量PCR(real time-PCR)检测的标准品质粒与标准曲线。方法通过PCR扩增出CYP4F2和β-actin目的片断,纯化后直接连接于p GEM-T ...
- 赵永攀石磊李晋李晓泽李健赵树进
- 关键词：Β-ACTIN基因实时荧光定量PCR重组质粒标准品
- 以凡纳滨对虾β-actin基因启动子为元件的重组昆虫杆状病毒表达系统的建立
- 凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）隶属于甲壳亚纲十足目，是目前全世界对虾养殖产业中产量和产值最高的经济物种。由于病害侵袭，对虾养殖业每年面临严重的损失。目前大量的研究集中于病害防治、遗传育种和水产养殖...
- 史英力
- 关键词：养殖对虾基因表达
- 中国鲎β-actin基因的克隆与组织表达被引量：1
- 2015年
- 中国鲎(Tachypleus tridentatus)是一种古老的海洋动物.利用RT-PCR和RACE等分子生物学技术,获得中国鲎β-肌动蛋白基因(中国鲎β-actin,简称为TTBA)全长cDNA序列,总共1 515bp,包括70bp 5′非编码区(untranslated regions,UTR)、314bp 3′UTR和一个1 131bp的开放阅读框(open reading frame,ORF).ORF可编码376个氨基酸残基,总分子质量约为41 807.7u.同源蛋白的序列比较结果显示,TTBA推导氨基酸序列与其他物种具有很高的相似性,推测β-actin基因具有很高的遗传保守性.而基于β-actin蛋白序列比对而绘制的系统进化树显示中国鲎与其他节肢动物具有较高的相似性,此结果与其现行的分类地位基本一致.以Real-time RT-PCR法检测表明,在卵子发生各期的卵巢组织中TTBA表达量保持稳定(p>0.05),可作为定量检测的内参基因.
- 李文杏黄静茹叶海辉黄辉洋李少菁
- 关键词：中国鲎Β-ACTIN基因克隆
